texo致敏树突状细胞体外抗骨肉瘤细胞的研究

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1、遵义医学院硕士学位论文Texo致敏树突状细胞体外抗骨肉瘤细胞的研究姓名：刘福慧申请学位级别：硕士专业：免疫学指导教师：黄俊琼201205遵义医学院硕士学位论文Texo致敏树突状细胞体外抗骨肉瘤细胞的研究Texo致敏树突状细胞体外抗骨肉瘤细胞的研究摘要目的探讨骨肉瘤细胞分泌的exosome体外刺激T细胞增殖和对骨肉瘤细胞的杀伤作用。方法1．采用超滤离心联合蔗糖密度梯度超速离心的方法从骨肉瘤细胞培养上清中分离肿瘤细胞分泌的exosome。2．透射电子显微镜鉴定Texo的形态。3．无菌分离Balb／c小鼠骨髓细胞，用rm

2、GM—CSF、rmlL．4和LPS体外诱导培养DC，倒置显微镜下观察细胞形态，流式细胞仪鉴定其表型。4．MTT法检测负载Texo的DC、未负载Texo的DC、Texo刺激T淋巴细胞增殖情况及以上三组激活的效应淋巴细胞对骨肉瘤细胞的杀伤力。结果1．透射电镜下见Texo为圆形或类圆形小体，大小不等，平均直径约150nm。2．／J、鼠骨髓细胞体外诱导培养：光镜下见细胞边缘有绒毛样突起，细胞体积较大，呈典型的树突状细胞形态。流式细胞仪检测未经LPS诱导(第6d)的DC表型：CD80、MHC．I、MHC—II类分子分别为42

3、．53％、54．96％、33．44％；经LPS诱导后(第8d)的DC表型的表达明显高于未经诱导的DC表型，分别为77．16％、83．21％、91．26％。3．(1)MTT法检测负载Texo的DC、未负载Texo的DC、Texo三组对T细胞增殖能力的影响，结果显示，Texo刺激T细胞增值率<1，增值率为O．76+0．06；负载Texo的DC组和未负载Texo的DC组均>1，分别为1．51+0．25，1．15+0．08。负载Texo的DC组与未负载Texo的DC组、Texo组相比，组间有显著性差异(P<0．05)。未负

4、载Texo的DC组与Texo组相比，有显著性差异(P<0．05)。(2)负载Texo的DC、未负载Texo的DC、Texo激活的效应淋巴细胞和对照组(LC)对骨肉瘤细胞的杀伤效应结果显示，负载Texo的DC组在效靶比12．5：l，25：1，50：1时，对骨肉瘤细胞杀伤率分别为13．3+8．55，32．63+6．29，48．034-6．94。未负载Texo的DC组在效靶比12．5：1，25：1，50：1时，对骨肉瘤细胞杀伤率分别为10．25+2．48，21．004-22．07，28．60+2．43。Texo组在效靶比

5、12．5：1，25：1，50：1时，对骨肉瘤细胞杀伤率分别为3．13+3．89，19．70+2．36，26．43+2．23。LC组在效靶比12．5：1，25：1，50：1时，对骨肉瘤细胞杀伤率分别为8．454-0．21，18．97士16．07，27．27：}3．41。负载遵义医学院硕士学位论文Texo致敏树突状细胞体外抗骨肉瘤细胞的研究Texo的DC组在效靶比为12．5：1时，其抗肿瘤活性与未负载Texo的DC组、Texo、LC组相比，没有显著性差异(P=O．059>0．05)；在效靶比25．-1，50．1时，其抗

6、肿瘤活性与其它三组相比有显著性差异(PO．05)。结论1．用超滤离心联合蔗糖密度梯度超速离心法能从骨肉瘤细胞培养上清液中分离Texo。2．／J、鼠骨髓细胞在GM．CSF、IL．4和LPS联合诱导下能培养成树突状细胞。3．单独的Texo不能刺激T淋巴细胞增殖及诱导CTL抗肿瘤作用，而负载Texo的DC疫苗能有效的刺激T细胞增殖和诱导CTL抗肿瘤作用，其杀瘤效果在25：1，50：1时为最佳。关键词骨肉瘤、树突状细胞、Texo、疫苗、免疫治疗

7、遵义医学院硕士学位论文Texo致敏树突状细胞体外抗骨肉瘤细胞的研究TheStudyontheAnti—M7K2cellImmunitybyDendriticcellloadedwithtumor-derivedexosomeAbstractobjectiveTostudytheexosomesecretedbyosteosarcomacellandtoobservewhethertheexosomehaseffectonTcellproliferationandparticipatingspecificanti—o

8、steosarcomaimmunityinvitro．Methods1．Exosomederivedfromtumorwasisolatedandpurifiedbyultracentrifugation．2．Exosomewasidentifiedbytransmissionelectronmicroscope．3．Themononuclearcellsf