卵巢癌肿瘤浸润淋巴细胞的抗肿瘤活性研究

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1、南方医科大学2010级硕士学位论文卵巢癌肿瘤浸润淋巴细胞的抗肿瘤活性研究Theantitumoractivityoftumor—infiltratinglymphocytesin●0VarlanCanCer课题来源：广东省科技计划项目(20118031800042)学位申请导师姓专业名培养类培养岳所在学人马丹宇名粱卫江称肿瘤学型科研型次硕士院第一临床医学院2013年3月31日广州硕士学位论文卵巢癌肿瘤浸润淋巴细胞的抗肿瘤活性研究硕士研究生：马丹宇指导教师：梁卫江研究背景摘要在世界范围内，卵巢癌是女性常见

2、恶性肿瘤之一。2008年，全球估计新发的卵巢癌患者超过220，000例，死亡的患者约140，200例。在中国，卵巢癌是女性生殖道三大恶性肿瘤之一，发病率居女性生殖道恶性肿瘤第三位，死亡率居首位。病理类型以卵巢上皮癌为主。卵巢癌多发生于中老年女性，诊断年龄50～70岁。因患者早期常无明显症状，诊断时已多为晚期。且卵巢上皮癌具有嗜浆膜腔特性，易出现恶性腹腔积液，甚至胸腔积液，临床治疗存在难点。患者的生活质量受到严重影响，出现胸、腹腔积液的患者平均生存期不到1年。现今研究普遍认为，恶性肿瘤的发生与机体免疫功能

3、的抑制有着密切关联。肿瘤浸润淋巴细胞(Tumor—infiltratinglymphocytes，TIL)是浸润在肿瘤组织周围的淋巴细胞，其受到肿瘤表面抗原的刺激而被激活，是近年来肿瘤免疫治疗的研究热点之一。因机体免疫功能及局部微环境的影响，体内肿瘤组织中存在的TIL数量较少，活力低下。已有研究表明，TIL在体外可被白介素．2(Interleukin．2，IL．2)等细胞因子诱导活化并扩增。继Rosenberg等首次报道TTIL良好的抗肿瘤效果后，又有不少关于TIL临床应用于治疗恶性肿瘤、恶性胸腹腔积液

4、的研究见诸报道。Fabbri等采用TIL／IL．2联合治疗39例肿瘤患者，其中恶性黑色素瘤18例，结肠癌19例，肾细胞癌2例。结果显示：恶性黑色素瘤患者中，64．7％(11例)生存期超过37个月；结肠癌患者中，44．4％(8例)生存期超过21个月；2例肾癌患者中文摘要中，1例生存期超过28个月。全部患者中，恶性黑色素瘤和结肠癌各有1例完全治愈。林菁等应用TIL／IL．2治疗107例肿瘤恶性胸腔积液患者，其中肺癌74例，乳腺癌2例，肝癌4例，卵巢癌9例，胃癌2例，大肠癌3例，鼻咽癌2例，宫颈癌8例，其他3

5、例。在可评价疗效的104例患者中，70．2％(73／104)完全缓解，22．1％(23／104)部分缓解，总有效率达92．3％。王玉玲等报道TIL／IL．2联合治疗12例晚期卵巢癌腹腔积液患者，总有效率达75％。肿瘤恶性胸腹腔积液的产生机制目前尚不十分明确，有待进一步研究。除外恶性肿瘤胸腹腔、大网膜的转移浸润，肿瘤细胞阻塞淋巴管导致回流障碍等原因外，有研究提示，肿瘤细胞可合成和分泌血管内皮生长因子(Vascularendothelialgrowthfactor，VEGF)、基质金属蛋A酶(Matrixm

6、etalloproteinase，MMPs)。它们不仅与肿瘤的浸润、转移密切相关，还可促进肿瘤血管生成、增加血管通透性，导致液体滤过增加，被认为在恶性浆膜腔积液的形成中起着重要作用。TIL对控制恶性胸腹腔积液有良好疗效，可能与减少VEGF和MMPs的合成、分泌相关。我们在临床应用过程中，从卵巢癌恶性胸腹腔积液分离获得TIL，在体外应用IL一2等多种细胞因子进行诱导活化并大量扩增，然后回输到胸腔、腹腔内，从而达到治疗恶性胸、腹腔积液的目的。现已观察到TIL疗法治疗晚期卵巢癌胸腹腔积液确实有良好疗效，待进一

7、步研究TIL的体外分离培养，了解其生物学特性、治疗机制等，同时结合肿瘤分子生物学进行系统的疗效评价，以期为临床推广应用提供实验室依据。目的研究卵巢癌TIL经IL．2诱导活化扩增前、后免疫表型及杀伤力的变化。探讨TIL对自体肿瘤细胞的致凋亡作用。分析经IL．2诱导活化扩增的TIL处理后，自体肿瘤细胞培养上清液中分子标志物(CA．125、CA．153、VEGF、MMP．9)的变化情况。通过上述研究对卵巢癌TIL的体外抗肿瘤活性进行探讨。硕士学位论文1．卵巢癌自体肿瘤细胞、TIL的获取及培养12例卵巢癌实体瘤

8、组织，来自南方医院妇产科新鲜手术标本。所有患者，术前均未行抗肿瘤治疗，术后均经过组织病理学确诊为卵巢上皮癌(病理类型为浆液性囊腺癌)。实体瘤组织经机械剪切至小于lmmxlmmxlmm后，加入0．1％II型胶原酶，4。C消化过夜，再加入0．02％透明质酸酶、0．004％DNA酶于37℃联合消化4d,时，100目、200目钢筛过滤，获得单细胞悬液。采用人淋巴细胞分离液(100％Ficoll．Hypaque)，分步低速离一tl,法、连续密度梯度离