氧化苦参碱抑制人肝癌细胞EGF和EGFR表达的研究

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1、氧化苦参碱抑制人肝癌细胞EGF和EGFR表达的研究作者：王文奇刘倩徐瀚峰时昌文吴洪文【摘要】目的：探讨氧化苦参碱对人肝癌细胞EGF及EGFR表达的影响。方法：将肝癌细胞株BEL7402在37℃、5%CO2条件下培养、传代。按氧化苦参碱浓度分为1000μg/ml、500μg/ml、250μg/ml组，对照组不加氧化苦参碱，每组设6个平行孔，每孔加入细胞1×105/ml，培养24h、48h和72h，分别进行EGF及EGFR的免疫组化染色。结果：不同浓度的氧化苦参碱均抑制EGF和EGFR在人肝癌细胞的表达，随着培养时间的延长，EGF和EGFR表达阳性率下降显著，在10

2、00μg/ml组24h、48h和72h的EGF和EGFR阳性率均较500μg/ml组和250μg/ml组同时段的阳性率下降显著。500μg/ml组和250μg/ml组同时段的阳性率无明显差异。结论：氧化苦参碱对EGF和EGFR的抑制途径可能是其抗肝癌机制之一。【关键词】氧化苦参碱・表皮生长因子・受体，表皮生长因子・癌，肝细胞InhibitingeffectofoxymatrineontheexpressionofEGFandEGFRinhumanhepatocellularcarcinomacellsinvitro【ABSTRACT】Objective:Toin

3、vestigatetheeffectofoxymatrineonEGFandEGFRexpressioninhumanhepatocellularcarcinomacells,:BEL740cellswereculturedundertheconditionof7℃,5%weretreatedbyoxymatrinewithdifferentconcentration,including1000μg/ml,500μg/ml,250μg/ml,and0μg/ml,andtheobservationperiodwasfrom4hgroupsweregroupcont

4、ainssixwells.Thereare1×105/mlcellsineachexpressionofEGFandEGFRwereobservedwithimmunohistological:TheexpressionofEGFandEGFRweresuppressedbyoxymatrinewithdifferentconcentrationandvariableGroupA(1000μg/ml),theexpressionofEGFandEGFRat4h,48hand2hdecreasedmoresignificantlythanGroupB(500μg/

5、ml),andGroupC(250μg/ml)(,).TherewerenosignificantdifferencebetweenEGFandEGFRexpressionatthedifferenttreatingdurationsinGroupBandGroup:OxymatrinecanplayacertainroleintreatmentoflivercancerthroughinhibitingtheexpressionofEGFandEGFR.【KEYWORDS】Oxymatrine・Epidermalgrowthfacter・Receptor,ep

6、idermalgrowthfacter・Carcinoma,hepatocellular表皮生长因子及其受体对肝癌的发病有一定的促进作用。近年研究表明，氧化苦参碱具有抑制肿瘤细胞增殖、诱导肿瘤细胞调亡［1］、抗纤维化等作用［2］，今观察其对人肝癌细胞EGF及EGFR表达的影响，报告如下。1材料和方法材料人肝癌细胞系BEL740由山东省医科院免疫室提供。氧化苦参碱粉由正大天晴有限公司提供，用生理盐水配成需要浓度。RPMI1640细胞培养液为美国Gibco公司产品。即用型鼠抗人EGFR单克隆抗体与鼠、兔通用型SP试剂盒和联苯二氨显色试剂均购自福州迈新生物技术开发有限

7、公司，浓缩型兔抗人EGF多克隆抗体购自武汉博士德生物工程公司，用抗原稀释液1∶30稀释后使用；小牛血清为天津TBD公司产品。细胞培养将肝癌细胞株BEL740培养于含10%小牛血清的PRIM1640培养液中，内加青霉素100U/ml和链霉素100μg/ml，37℃、5%CO2条件下在75细胞培养瓶中培养、传代，分装于多个培养瓶，采用处于对数生长期的细胞进行实验。分组按照氧化苦参碱的浓度不同分为3组，即1000μg/ml、500μg/ml、250μg/ml，对照组不加氧化苦参碱，每组设6个平行孔，每孔加入细胞1×105/ml，加入不同浓度氧化苦参碱后培养24h、48

8、h和72h，分别进行EG