红缘拟层孔菌氯仿提取物对人结直肠癌sw-480细胞的增殖和迁移抑制及其作用机制研究

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1、分类号Ｑ２７４密级学号１２２０７７硕±学位论文（学术型）题目红缘拟层孔菌氯仿提取物对人结直肠癌ＳＷ－４８０细胞的增殖和迁移抑制及其作用机制研究作者王亚芹指导教师刘全宏教授－级学科名称生物学二级学科名称细胞生物学提交日ｍ二〇—五年五月学位论文原创性声明本人声明所呈交的学位论文是我在导师的指导下进行研巧工作所取得的研究成果。尽我所知，除文中已经注明引用的内容和致谢的地方外，本论文不包含其他个人或集体已经发表或撰写过的研巧成果

2、，也不包含本人或他人已申请学位或其他用途使用过的成果。对本文的研巧做出重要贡献的个人和集体，均己在文中作了明确说明并表巧谢意。本学位论文若有不实或者侵犯他人权利的一，本人愿意承担切相关的法律责任，作者签名日親戸年／月ｔｅｙ学位知识产权及使用授权声明书本人在导师指导下所完成的学位论文及相关成果，知识产权归属陕西师范大学。本人完全了解陕西师范大学有关保存、使用学位论文的规定，允许本论文被査阅和借阅，学校有巧保留学俭论文并向国家有关部口或机构送交论文的纸质版，和电子

3、版，有权将本论文的全部或部分内容编入有关数据库进行检索可Ｗ采用任何复制手段保存和汇编本论文。本人保证毕业离校后，发表本论文或使用本论文成果时署名单位仍为陕西沛范大学？保密论文解密后适用本声明。作者签名：日親ｖ〇扩年（月曰ｙ摘要研究背景及目的’红缘拟层孔菌仍加／〇７５７、ｍｃｏ／ａＷ．；仍作反ｗＷ为世界性分布的木腐真菌，［／如彷］因其具有一定药用价值在西方国家Ｗ及中国、日本、韩国等亚洲国家均有广泛应用。例如，，在西方国家红缘拟层孔菌主要用于治疗头晕、恶也和肝病等在；而、

4、中国，其主要用于柱风除湿、解热、强屯、补肺益肾、和胃健脾、安神定志、扶、正培本、滋补强壮。现代药理学研究表明，红缘巧层孔菌对脑溢血、屯脏病、糖尿病、贫血、肾炎、支气管炎等病也有较好疗效。近年来，红缘拟层孔菌醇提物的抗肿瘤研究也屡见报道，。因此本论文Ｗ红缘拟层孔菌中细胞毒性较强的氯仿提取物（ＦＰＫｃ）为主要研究对象，分析了其中的化学成分，评价了细胞水平和整体动物水平的抗肿瘤效果，并对ＦＰＫｃ杀伤肿瘤细胞的作用机制进行初步研巧。旨在为具有自主知识产权的抗癌新药研发提供理论依据，同时为红缘

5、拟层孔菌应用于结肠癌的临床治疗提供科学参考。研究方法及结果首先，建立高效液相色谱法１，，＾获《酸麦角链醇和去氨齿孔酸标准品作为对照，定性定量分析红缘拟层孔菌氯仿提取物（ＦＰＫｃ）的化学成分。结果显示，麦ＦＰＫ１．．２５％。角酱醇，巧《酸和去氨齿孔酸在ｃ的含量分别为０．５％，３５６％和０此－夕ｈＨＰＬＣ分析显示，经ＦＰＫｃ作用后的ＳＷ４８０细胞裂解液中有麦角留醇存在。ｃ其次，ＭＴＴ实验检测了ＦＰＫ对Ｈ种结直肠癌细胞的毒效应，结果表明，ＦＰＫｃＳＷ－４８０－－能不同程度抑制体

6、外培养的结直肠癌、ＳＷ６２０、Ｃａｃｏ２细胞的増殖，并呈现时间、剂量依赖性；不同的结直肠癌细胞对ＦＰＫｃ的敏感程度也具有差异性，－－８ｈ，ＳＷ４８０６２０细５０）９０药物作用４后和ＳＷ胞的半数抑制率（ＩＣ分别为１．２８ｎｇ／ｍｌｉ－和１４３．２６／ｍｌ，而药物作用７２ｈ后，ＦＰＫｃ对Ｃａｃｏ２细胞才表现出明显的杀伤作｜ｇ用ｃ－４８０细胞发生调。ＦＰＫ杀伤结肠癌细胞的作用机制研究表明，其能够诱导ＳＷ亡，ＨＯ染色后，巧光显微镜下能够观察到明显的核凝集现象；流式细胞仪分析结－，果显

7、示：胖Ｋｃ能够对ＳＷ４８０细胞的ＤＮＡ造成明显损伤并引起细胞Ｇ１期阻滞；ｅｓ显活化Ｃａｓ－－Ｗｔｅｒｎｂｌｏｔｔｉｎｇ结果显示，ＦＰＫｃ能够明ｐａｓｅ３和ＰＡＲＰ，下调Ｂｃｌ２的表达；此外，ＦＰＫｃ能够弓Ｉ起细胞内谷脫甘狀含量的下降，进而引起胞内活性氧的Ｉ积累，最终导致细胞调亡。同步的研究结果也提示，ＦＰＫｃ中相对含量较高的ＥＳＳＷ－４８０同样能够诱导细胞发生潤亡。ｅ－接下来，通过损伤修复和Ｔｒａｎｓｗｌｌ实验研巧了ＦＰＫｃ对ＳＷ４８０细胞迁移能ＦＰＫＷ－４８０力的影响，结果

8、显示，高浓度ｃ对Ｓ细胞的迂移抑制率高达７０％。借助－免疫巧光法发现ＦＰＫｃ能够显著抑制ＳＷ４８０细胞胞外基质金属蛋白酶ＭＭＰ－２和－ＭＭＰ９的表达。同步的研巧结果也提示，ＦＰＫｃ中相对含量较高的ＥＳ同样能够下－调ＭＭＰ－２和ＭＭＰ－９ＳＷ４８０细胞。的表达，并抑制的迁移Ｓ１８０荷瘤小鼠模型ＦＰＫｃ最后，利用腹腔注射和皮下接种构建，与对照组相比，能够盈著抑制Ｓ１８０实体瘤体积，延长腹水瘤小鼠的存