桦褐孔菌提取物对人胃癌bgc823细胞株诱导凋亡作用和抗增殖的机制

《桦褐孔菌提取物对人胃癌bgc823细胞株诱导凋亡作用和抗增殖的机制》由会员上传分享，免费在线阅读，更多相关内容在工程资料-天天文库。

1、桦褐孔菌提取物对人胃癌BGC823细胞株诱导凋亡作用和抗增殖的机制作者：钟秀宏孙东植高宇杨淑艳崔基成【摘要】目的探讨桦褐孔菌提取物在体外对人胃癌BGC823细胞株的诱导凋亡和抗增殖的作用机制。方法应用TUNEL法和免疫细胞化学染色法检测桦褐孔菌提取物对人胃癌BGC823细胞株的作用。结果10～80mg/L桦褐孔菌提取物作用人胃癌BGC823细胞株后，肿瘤细胞凋亡率与药物浓度正相关，Ki67阳性表达率随药物浓度的增加而减少，表现出浓度依赖性关系。80mg/L桦褐孔菌提取物作用48h后，bcl2基因蛋白的阳性表达率明显降低，而bax

2、、caspase3基因蛋白阳性表达率明显升高。结论桦褐孔菌提取物对人胃癌BGC823细胞株有诱导凋亡和抗增殖作用，其诱导凋亡的分子生物学机制可能是通过下调bcl2和上调bax的表达，启动caspase凋亡信号实现的。【关键词】桦褐孔菌；胃肿瘤；细胞凋亡　桦褐孔菌是一种主要生长在桦树上的药用真菌，属担子菌纲多孔菌科〔1〕。近年来，有关桦褐孔菌的化学成分、药理作用及机制研究方面都有新的报道〔2,3〕，特别是抗肿瘤作用引起俄罗斯、北欧、日本、美国及韩国等国家的相关学者的重视，为了探讨其抗肿瘤作用机制，本研究室在前期研究发现桦褐孔菌提取物对胃

3、癌BGC823细胞株的增殖有抑制作用，并有明显的肿瘤细胞凋亡形态学改变〔4〕。为进一步探讨桦褐孔菌提取物对人胃癌BGC823细胞株的诱导凋亡和抗增殖作用及其机制，本研究室继续选用人胃癌BGC823细胞株，通过TUNEL法和免疫细胞化学染色法进行本项实验，以期对桦褐孔菌防治肿瘤有更深入认识。　　1材料与方法　　1.1胃癌细胞株与主要试剂　　人低分化胃癌BGC823细胞株购自中科院上海细胞所。桦褐孔菌提取物由吉林省延边圣霖菌业有限公司提供。RPMI1640培养基Gibco公司产品，无支原体胎牛血清为北京华美公司产品，胰蛋白酶为Difco

4、公司产品，bcl2、bax及caspase3鼠抗人单克隆抗体为北京中山生物技术有限公司产品，Ki67工作液及免疫组化检测试剂盒为福州迈新生物技术开发公司产品。　　1.2体外细胞复苏与培养　　人胃癌BGC823细胞株复苏后，用RPMI1640培养基（含10％胎牛血清、100kU/L青霉素、100kU/L链霉素)，在5%CO2，37℃条件下常规培养。胃癌细胞传代之旺盛，于实验前24h半量换液，用4g/L台盼蓝染色3min，观察活细胞。本实验所用的活细胞均在98%以上。　　1.3实验分组及药物处理　　将胃癌BGC823细胞株随机分为对照

5、组及4个不同浓度桦褐孔菌提取物组。对照组培养液中加生理盐水，实验组分别给予10、20、40、80mg/L桦褐孔菌提取物。　　1.4制作细胞爬片　　将无菌的盖玻片置于6孔细胞培养板中，每孔1片，取对数生长期细胞，以2.5g/L胰蛋白酶消化，再用含100g/L胎牛血清的RPMI1640培养液配成单个细胞悬液，稀释成1×108/ml，取0.5ml细胞悬液滴加于盖玻片上，37℃，5%CO2及饱和湿度下孵育2h，每孔加培养液2ml，次日，每孔按实验分组药物处理，48h后取出盖玻片，固定保存。　　1.5TUNEL染色法　　取出盖玻片，实验操作按北京中山

6、生物技术有限公司试剂说明书略加修正进行。染色后，在真彩病理细胞图像分析系统中求得凋亡细胞数。结果判定：在TUNEL染色中细胞凋亡阳性物质呈棕黄色，位于细胞核内，随机选取10个高倍镜视野，计算凋亡指数(AI)。　　1.6免疫细胞化学染色法　　取出盖玻片，实验操作按SP试剂盒说明书略加修正进行。染色后，在真彩病理细胞图像分析系统中求得Ki67阳性细胞和bcl2、bax、caspase3阳性细胞数。结果判定：在免疫细胞化学染色中，阳性表达物质均呈棕黄色，Ki67、bcl2、bax、caspase3阳性反应为棕黄色，其中Ki67定位

7、于细胞核内，部分细胞核分裂时显示出整个细胞的阳性反应。bcl2、bax定位于胞浆，也可见于胞膜和核膜，caspase3定位于胞浆。计算阳性表达率，随机选取10个高倍镜视野，计算阳性表达率（%)。　　1.7统计学处理　　数据以x±s表示，利用SPSS11.0软件进行t检验。　　2结果　　2.1TUNEL法检测药物对胃癌BGC823细胞株的诱导凋亡作用　　经10～80mg/L桦褐孔菌提取物作用于胃癌BGC823细胞株后，均能诱导肿瘤细胞凋亡，其AI分别为（6.57±0.92)%、（12.55±1.48)%、（18.96±2.28)%、（

8、26.35±1.83)%，显示明显的量效关系，不同浓度之间的AI有显著性差异（P＜0.01)。　　2.2免疫细胞化学检测药物对胃癌BGC823细胞株的抗增殖作用　　经10～80