探析高密度脂蛋白胆固醇检测方法的研究

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1、南京理工大学硕士学位论文高密度脂蛋白胆固醇检测方法的研究姓名：沈凤翠申请学位级别：硕士专业：化学工艺指导教师：董伟20090601硕士论文高密度脂蛋白胆固醇检测方法的研究摘要本文采用选择性抑制法研制检测人体血清高密度脂蛋白胆固醇(HDL．C)含量的试剂盒。根据脂蛋白的性质，设计研制出试剂盒中试剂I的基础配方，探索其与不同的表面活性剂的相互作用，选择性地解离高密度脂蛋白(如DL)同时抑制低密度脂蛋白(LDL)解离的方法，从而达到无需沉淀分离脂蛋白而直接检测HDL．C的目的。通过多次重复实验发现，当硫酸洳环糊精浓度为O．01l

2、g／L，M92+浓度为1．29／L，葡聚糖浓度为O．7p,／L，TOOS显色剂浓度为0．15g／L时，研制的试剂盒对纯LDL的响应较小，基本达到了对LDL的抑制解离要求。经过大量的筛选实验发现只有非离子表面活性剂对脂蛋白具有选择性解离作用，而且当FILB(亲水亲油平衡值)在13～14之间时，表面活性剂对脂蛋白选择性效果较好，当表面活性剂复配时选择性反而降低。在所筛选的多种表面活性剂中，发现B一66对LDL具有较好的选择性抑制解离效果，NP一7的选择性解离HDL效果较好。最终采用上述研究成果配制HDL．C试剂盒对具有高、中、

3、低浓度HDL．C的血清分别进行检测，发现对具有中浓度HDL—C的血清检测结果较好，达到临床检验的要求，但对低和高浓度HDL．C的血清检测存在一定的误差，需进一步研究和实验。关键词：高密度脂蛋白，低密度脂蛋白，胆固醇，表面活性剂，选择性Abstract硕士论文Thispaperappliespolyanion-polymer／detergent(PPD)assayforquantifyingthehighdensitylipoproteincholesterol(HDL—C)．Theformulaofreagent1wasd

4、evelopedaccordingtothecharactersoflipoprotein．TheinteractionofSurfactantswithhighdensitylipoprotein(HDL)andlowdensitylipoprotein(LDL)wasinvestigated．TheaimofthestudywastoinvestigateanewanalyticalprotocoltodirectlymeasureHDL-Cwithoutprecipitation．Thekithadlowrespon

5、setoLDLwhenthereagent1wascomposedof0．01lg／La-SCD，1．29／LMg计，O．7g／LDSando．15g／LToes；Non—ionicsurfactantswhoseHLBarebetween13and14werefoundtobreaklipoproteinmoreeffectivelywithalargenumberofexperiments，theselectivitywasloweredwhenthesurfactantsweremixed．B-66showedthe

6、highestselectivitytoLDLandNP-7showedthehighestselectivitytoHDL．Atlast，whenthepreparedkitassayeddifferentserotypeswhichhadlow,middleandhighconcentrationofHDL，itshowedgoodresultsontheserumwithmiddleconcentrationofHDL，howeverthereweresomeerrorsintheassayedresultsofth

7、eserumwiththelowandhighconcentrationofHDL．Keywords：HDL，LDL，cholesterol，Surfactant，SelectiveⅡ硕士论文高密度脂蛋白胆固醇检测方法的研究图表目录图1．1胆固醇逆转运过程示意图⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯5图2．1洳环糊精的结构⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯14图3．1合成的a-SCD红外光谱⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯18图3．2B一66的不同浓度对高低密度脂蛋白的解离度⋯⋯⋯

8、⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯25图3．3NP．7的不同浓度对高低密度脂蛋白的解离度⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯．．32图3-4加入试剂I和试剂Ⅱ后吸光值的变化⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯33表1．1高密度脂蛋白富含颗粒分类⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯2表2．1主要实验仪器⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯