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1、实用标准文案高密度脂蛋白胆固醇(HDL-C)测定1.第1页页首内容血清高密度胆固醇(HDL-C)测定(直接法)天津市宝坻区人民医院检验科操作规程文件号:CZGC/SH/043第四版共3页本规程每2年复审一次复审日期:2013年5月1日复审人:陈玉良(签名)规程编写者:崔树明审批者:陈玉良批准日期:2013年5月6日实施日期:2013年5月10日文件分发部门和/或个人:检验科医务科;保管者:王文志(签名)院长办公室;保管者:刘会芹(签名)院档案室;保管者:刘会芹(签名)检验科;主任:陈玉良(签名)临床化学检验室:崔树明(签名)2.原理本方
2、法是双试剂测定,第一种试剂包含聚合物和多聚阴离子,它们附着在LDL,VLDL和乳糜微粒的表面。这些脂蛋白甚至在清洁剂存在的情况下都是稳定的,清洁剂是作为第二种试剂的一部分被添加进去的,另外一部分是胆固醇试剂剩下的成分。另一方面,HDL颗粒在聚合物和多聚阴离子存在的情况下是不稳定的,它们被清洁剂溶解。因此,只有HDL-C作用于胆固醇测定。胆固醇脂酶高密度脂蛋白胆固醇脂+H2O-------------﹥胆固醇+脂肪酸胆固醇氧化酶胆固醇+O2-------------﹥胆烯酮+H2O2过氧化物酶H2O2+4-氨基安替比林+DSBmT----
3、---------﹥醌亚胺+H2O3.样本采集与处理3.1受检者(体检对象或病人)的准备:除总胆固醇不一定用空腹血外,测定甘油三酯、脂蛋白与载脂蛋白的病人必须空腹12h,不饮酒24h后采集血样。对于体检对象抽血前应有2周时间保持平时的饮食习惯,近期内体重稳定,无急性病、外伤、手术等意外情况。妊娠后期各项血脂都会增高,应在产后或终哺乳后3个月检验才能反映其基本血脂水平。注意有无应用影响血脂的药物,如降血脂药、避孕药、噻嗪类利尿剂、β精彩文档实用标准文案受体阻断剂、免役抑制剂、某些降压药、降糖药、胰岛素及其他激素制剂等,检验以前应根据所用药
4、物的特性停止用药数天或数周,否则应记录用药情况。对体检对象应做前瞻性观察者,还应注意采血的季节,因为血脂水平有季节性变动,为了前后比较应在每年同一季节检验。应嘱体检对象在抽血前24h内不做剧烈运动。3.2静脉采血:除非是卧床的病人,一般在采血时取坐位。体位影响水分在血管内外的分布,因此影响血脂水平。例如:站立5min可使血脂浓度提高5%,15min提高16%,故在采血前至少应静坐5min。一般从肘静脉采血,使用止血带的时间不超过1min,穿刺成功后立即松开止血带。静脉阻滞5min可使甘油三酯增高10%-15%。采血试管采用真空采血管。3
5、.3样本类型:采用无溶血的血清。如用血浆,宜采用EDTANa2(1mg/ml)抗凝。抗凝血浆中的总胆固醇和甘油三酯水平比血清中约低3%。EDTA用量越多,血浆水平偏低越明显。但肝素抗凝不影响血浆中水平。3.4样本处理:血标本应尽快送检验室。室温下放置30-45min后离心分离血清或血浆置样品杯中待测。若不能及时检测,置于洁净试管中加塞后4℃保存,可稳定4天。4试剂4.1试剂:本室使用日本积水公司生产的液体双试剂试剂盒,试剂为浅粉红色透明液体,直接使用。批号为KB573。4.2试剂组成:试剂主要成分如下:MES缓冲液(PH6.5)100m
6、mol/L胆固醇氧化酶≥0.2U/mL胆固醇脂酶≥0.15U/mL过氧化物酶≥0.62U/mLDSBmT0.25mmol/L4氨基安替比林0.5mmol/L多聚阴离子>0.02%清洁剂>0.2%其中含有保护剂。注意:1.此试剂为体外诊断用。2.不要吸入。吞服有害。4.3试剂的储存与稳定性:未开封的试剂于2-8℃保存,稳定至有效期。4.4校准血清:BECKMAN公司提供的多项定标液,产品批号为0115。为冻干品,未开封者2-8℃保存至有效期。临用前用5ml去离子水复溶,放置30min,混匀待完全溶解后使用。复溶的血清2-8℃可稳定4天。4
7、.5质控品:RONDOX公司提供,LECEL-2及LEVEL-3,产品批号为759UN及551ue。冻干品,未开封者2-8℃保存至有效期。使用前用5ml去离子水复溶,30分钟后轻轻混匀,待完全溶解后使用。复溶后的血清2-8℃可稳定4天。每天随样品一起测定,测定值应在允许范围内。5仪器奥林巴斯AU2700全自动生化分析仪6操作6.1AU2700开机6.1.1.检查W1、W2清洗液及稀释液有足够量,不足时补充;6.1.2.打开水机水源的自来水阀门,按水机前面板的(POWERON)键,开启水机;6.1.3.按分析仪前面板的(POWERON)键
8、,开启分析仪主机;6.1.4.确认打印机为开机并处于联机状态,开启中文机;6.1.5.确认仪器上在线试剂的位置是否正确、数量(体积)是否充足,不足时添加,并在系统状态下的试剂状态检查试剂。精彩文档实用标准文
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