高密度脂蛋白胆固醇的检测方法及标准化研究进展

《高密度脂蛋白胆固醇的检测方法及标准化研究进展》由会员上传分享，免费在线阅读，更多相关内容在行业资料-天天文库。

1、高密度脂蛋白胆固醇的检测方法及标准化研究进展众多流行病学研究证实，高密度脂蛋白胆固醇(HDL-C)水平与动脉粥样硬化(AS)呈负相关。美国Framingham的研究显示，HDL-C每减少0.026mmol/L(1mg/dl)，冠心病(CHD)发生的风险将增加2%～3%。目前临床上已广泛采用HDL-C下降作为CHD危险因素指标。低HDL-C［?.91mmol/L(35mg/dl)］是CHD的主要危险因素，而高HDL-C［≥1.55mmol/L(60mg/dl)］被认为是负危险因子，具有保护性［1，2］。作者参考美国国家胆固醇教育计划(NCEP)有关文件及新近文献资料，对HDL-C检测方法及标准化

2、问题作一简述。一、HDL的生物化学与乳糜微粒(CM)、极低密度脂蛋白(VLDL)和低密度脂蛋白(LDL)相比，高密度脂蛋白(HDL)是密度最大的脂蛋白(d=1.063～1.210kg/L)。其组分中蛋白质(Pro)、磷脂(PL)、胆固醇(chol)和甘油三酯(TG)各约占50%、25%、20%和5%。HDL中Pro主要是载脂蛋白(apo)AI和AII；chol占总胆固醇(TC)的25%～35%，酯化胆固醇(CE)和游离胆固醇(FC)之比约为3∶1。HDL可通过酶和受体的作用，将周围组织的chol移至肝脏降解处理，同时抑制细胞结合和摄取LDL-C，阻止chol在动脉壁的沉积，故HDL被认为是AS

3、的预防因子［3］。二、HDL-C检测方法由于所有脂蛋白都含有chol，因此必须从其他脂蛋白中分离出HDL后再行测定。分离HDL的方法有超速离心法、凝胶过滤法、免疫化学法、电泳法及化学沉淀法。临床化学实验室应用最广泛的是化学沉淀法。近来国外连续报道了几种HDL-C的直接测定方法，因其简便、快速，能进行自动化分析，已引起广泛关注。1.参考方法：美国疾病控制与预防中心(CDC)测定HDL-C的参考方法为超速离心法，也为NCEP所推荐［4］。该法分三步进行：(1)超速离心(40000r/min，18.5小时)除去密度(d)＜1.006kg/L富含TG的脂蛋白(CM、VLDL)。(2)下层悬浮液用肝素-

4、MnCl2法(Hep-Mn2+法)离心沉淀(1500×g，30分钟)，以除去富含apoB的脂蛋白［LDL、Lp(a)］。(3)测定上清液中chol含量，方法用CDC参考方法(ALBK法)。此法主要用于靶值的确定及各种HDL-C检测方法学评价，也是国际间人群调查研究准确性基础。由于需超速离心机，操作复杂且严格，所需标本量大(5ml血浆)，离心时间长，一般实验室难以开展，不适于大规模标本比较研究。CDC胆固醇参考方法实验室网络(CholesterolreferenceMethodLaboratoryNetwork,CRMLN)近来选用了一种“指定性比较方法”作为转移CDC参考方法准确性的适用方法。

5、此法首先用硫酸葡聚糖(DS50，分子量5万)作沉淀剂(DS50-Mg2+)，离心沉淀，除去含apoB的脂蛋白［CM、VLDL、IDL、LDL和Lp(a)］；然后上清液HDL中胆固醇采用ALBK法测定。这种方法已在网络的每个实验室被仔细评价及成功地进行标准化，相对CDC参考方法而言，已大为简化［5］。发展与CDC参考方法结果具有可比性的改良简单化参考方法将会促进HDL-C标准化在常规实验室中的开展。2.化学沉淀法：常用的沉淀剂为多阴离子，如磷钨酸(PTA)、DS、肝素(Hep)或非离子多聚体如聚乙二醇(PEG)与某些两价阳离子(如Mg2+、Ca2+、Mn2+)合用能使除HDL外含apoB的脂蛋白

6、都沉淀。沉淀形成的机制还不十分清楚。HDL中chol多用酶法(CHOD-PAP)测定。此类方法操作简单，不需昂贵设备且费用较低，适用于普通实验室。被NCEP推荐为常规方法［5］。早期的沉淀法如用Hep-Mn2+法，易受高TG干扰，使沉淀后的上清呈浑浊状，且Mn2+干扰酶法测定chol，故目前已基本不用。只是CDC-NHLBI(国立心肺血液学研究所)现存的有关HDL-C与CHD风险的流行病与临床数据库源于此法，故NCEP建议予以保留。PEG6000-Mg2+法沉淀效率高，与CDC参考方法有较好一致性，但精密度较差，美国现已很少采用。Warnick等［6］推荐用DS50-Mg2+法，认为其对分离H

7、DL有较好特异性，但因国内试剂馈缺而限制了其应用。以往报道用DS500-Mg2+法(DS500，分子量为50万)测定HDL-C结果偏低，但将血清与沉淀剂之比改为1∶1后，高脂对VLDL沉淀的干扰大大降低，提高了检测的精密度与准确度［7］。PTA-Mg2+法不干扰酶法测定chol，且试剂易得，对高TG血清也能完全沉淀，是目前临床实验室应用最多的方法，美国有50%以上的商品试剂用此法。Demacker