鼻渊舒口服液调控慢性鼻-鼻窦炎表皮葡萄球菌细菌生物膜相关agrA、luxS基因的研究

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1、（临床医学院）二0一八届硕士研究生学位论文鼻渊舒口服液调控慢性鼻-鼻窦炎表皮葡萄球菌细菌生物膜相关agrA、luxS基因的研究StudyonthechangesofagrAandluxSgenesintheprocessofBiyuanshuoralliquiddestructingStaphylococcusEpidermidisBiofilmofCRS研究生姓名：曹刘指导教师：谢慧教授学科专业：中医五官科学二○一八年五月1学位论文鼻渊舒口服液调控慢性鼻-鼻窦炎表皮葡萄球菌细菌生物膜相关agrA、luxS基因的研究曹刘指导教师姓名：谢慧教授申请学位级别：硕士研究生专业名称：中医五官科学论文

2、提交时间：论文答辩时间：二○一八年五月2摘要研究目的本课题前期研究明确清胆泻热法（代表方为鼻渊舒口服液）通过抑制鼻腔优势菌种表皮葡萄球菌生物膜形成而起效。立足于这一基础，本研究通过RT-PCR技术检测成膜相关基因agrA、luxS、atlE的表达，探讨慢性鼻-鼻窦炎细菌生物膜形成的分子机制。研究方法纳入符合标准的胆腑郁热型慢性鼻-鼻窦炎患者为治疗组；纳入健康者为对照。对照组不进行任何处理，取中鼻道分泌物进行指标检测，治疗组予以华神集团出产的鼻渊舒口服液服用，连续服用2个疗程（14天），在服药前后分别取同一侧中鼻道鼻腔分泌物。选择分离优势菌种为表葡菌且治疗前鼻腔表皮葡萄球菌生物膜（+），经治疗

3、后转为鼻腔表皮葡萄球菌生物膜（-）的临床样本纳入试验组；其中治疗前标本8例为试验组1，治疗后标本8例为试验组2，健康人标本4例为对照组。设计并合成引物，运用RT-PCR技术分别检测出细菌生物膜调控基因：表皮葡萄球菌：agrA、luxS、atlE服药前后的表达量，BB170哈氏弧菌发光法检测AI-2分子信号强度，最后经统计学分析得出结论。研究结果1.所有样本统计结果：治疗后luxS基因表达较治疗前高（P<0.05），但治疗前、治疗后分别与健康对照组相比，差异无统计学意义（P>0.05）（P>0.05）；agrA基因、atlE基因表达量治疗前与治疗后、及治疗前后分别与健康对照组比较均无差异（P>

4、0.05）。2.luxS/AI-2通路起效部分病例统计结果：治疗后luxS基因表达较治疗前高（P<0.05），且治疗前低于健康对照组（P<0.05），而治疗后与健康对照组无差异（P>0.05）。agrA基因、atlE基因表达量治疗前与治疗后、及治疗前后分别与健康对照组比较均无差异（P>0.05）。3.agr通路起效部分病例统计结果：治疗后agrA基因表达较治疗前减少（P<0.05），且治疗前与健康对照组无差异（P>0.05），而治疗后低于对照组（P<0.05）。luxS基因、atlE基因治疗前与治疗后、治疗前后与健康对照组比较，差异均无统计学意义（P>0.05）。4.相关性分析结果：agr通

5、路起效部分病例，不同指标差值相关性检验结果显示，两两指标之间均无相关性。对agrA与atlE行差值线性相关趋势分析可观察到负相关趋势。3结论1.在鼻渊舒口服液治疗CRS主要通过抑制优势菌群表葡菌生物膜起效，其膜抑制能力可能通过复杂的基因调控网络起效，这一复杂系统可能包括QS系统关键基因luxS及相关生物信号AI-2、agr系统关键基因agrA及相关粘附调控基因atlE。2.鼻渊舒口服液对关键基因luxS的调节表现为上调，通过上调luxS基因降低了AI-2信号，负调控达到成膜抑制效果；对关键基因agrA的调节表现为下调，正调控达到成膜抑制效果。3.对agr相关粘附基因atlE的调节表现较复杂，

6、既有上调也有下调，表明鼻渊舒口服液并非通过agr-atlE通路的单一线性调节影响表葡菌BF形成，而是可能直接调节atlE的表达，或者存在其他复杂通路同时影响atlE的表达。关键词清胆泻热法；鼻渊舒口服液；成膜抑制；基因调控4AbstractObjectiveAttheearlystageofthesubjectofthisresearchstudyfoundgallbladder’sheatmethod(onbehalfofBiyuanshuoralliquid)workbyinhibitingadvantagebacterialbiofilmformationofstaphylococcu

7、sinnasalcavity.Detecttheexpressionofbiofilmforming-associatedagr,luxS,atlEgenesystembyrt-pcrtechnique,inordertoexplorethecomplexregulatorymechanismofinhibitingBFfromthegeneregulation.MethodologyAtotalof8pat