鼻渊舒口服液对胆腑郁热型慢性鼻-鼻窦炎患者鼻腔细菌生物膜形成的影响

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1、学位论文鼻渊舒口服液对胆腑郁热型慢性鼻-鼻窦炎患者鼻腔细菌生物膜形成的影响TheinfluenceofBiyuanshuOralLiquidontheresearchofstagnatedheatofgallbladderCRSpatientswithnasalbacterialbiofilmformation厍红红指导教师姓名：毛得宏教授申请学位级别：硕士专业名称：中医五官科学论文提交时间：2018年4月论文答辩时间：2018年5月二○一八年五月2中文摘要目的：观察胆腑郁热型慢性鼻-鼻窦炎患者及健康者

2、窦口鼻道复合体处分泌物中提取的表皮葡萄球菌临床分离株有无细菌生物膜形成；研究鼻渊舒口服液对慢性鼻-鼻窦炎患者治疗前后鼻-鼻窦表皮葡萄球菌生长量及生物膜形成能力的影响；利用激光共聚焦显微镜观察表皮葡萄球菌生物膜的数量及结构变化。方法：1.纳入符合条件的胆腑郁热型慢性鼻-鼻窦炎患者15例及健康者10例，并给予鼻渊舒口服液（华神集团），每日3次，每次1支，进行2周治疗，健康正常人不做任何处理。2.采集胆腑郁热型慢性鼻-鼻窦炎患者治疗前后及健康者窦口鼻道复合体处分泌物，进行常规培养，分离出表皮葡萄球菌的样本并进

3、行保种、冻存。3.利用刚果红培养基筛选多糖黏附素（PIA）阳性表达株。4.利用96孔酶标结晶紫法判定表皮葡萄球菌产膜能力及生长量变化，对比慢性鼻-鼻窦炎患者治疗前后鼻-鼻窦表皮葡萄球菌产膜变化。5.利用激光共聚焦显微镜观察鼻-鼻窦表皮葡萄球菌细菌生物膜的形成过程。结果：1.刚果红细菌培养法定性实验：治疗前组15个菌株中，PIA+菌株10株，治疗后组15个菌株中，PIA+菌株6株，对照组10个菌株中，PIA+菌株3株。2.96孔酶标结晶紫法定量实验：慢性鼻-鼻窦炎患者治疗前鼻-鼻窦表皮葡萄球菌15株，其中

4、产膜菌株占67%，治疗后鼻-鼻窦表皮葡萄球菌15株，其中产膜菌株占40%，正常人鼻-鼻窦表皮葡萄球菌10株，其中产膜菌株占30%。治疗前PIA+组与治疗后PIA-组在0h、1h、2h、18h等时间点两组游离菌生长量差异无统计学意义（P>0.05）。在4h、8h、24h时，治疗前PIA+组游离菌生长量与治疗后PIA-组游离菌生长量相比，有统计学意义（P<0.05）。治疗前PIA+组与治疗后PIA-组在8h、18h、24h时，两组间黏附菌细菌生长量差异有统计学意义（P<0.05），其中24h时，治疗前PIA

5、+组黏附菌细菌生长量与治疗后PIA-组黏附菌生长量相比较，有显著差异性（P<0.01），在0h、1h、2h、4h间治疗前PIA+组黏附菌生长量与治疗后PIA-组比较无统计学意义（P＞0.05）。33.激光共聚焦下见：表皮葡萄球菌在4h可以在盖玻片上看到散在的标记为红色的细菌，8h细菌数量逐渐增加，有绿色荧光环绕于细菌周围，由此可以说明生物膜开始形成，20h细菌较聚集，逐渐形成初期生物膜；24-48h大片的生物膜形成，细菌的周围有大量的多糖形成的基质，镶嵌紧密，提示此时生物膜已经分化成熟。72h后黏附于玻

6、片的细菌量及细菌胞外多糖减少，生物膜结构逐渐解聚，进入解聚再定植期。结论：1.胆腑郁热型慢性鼻-鼻窦炎患者及健康者鼻-鼻窦表皮葡萄球菌临床分离株均有细菌生物膜形成，慢性鼻-鼻窦炎患者较健康者产膜率较高。治疗前与治疗后相比，治疗后PIA表达率下降，在判断产膜能力上，定性和定量试验无明显差异性。2.鼻渊舒口服液可降低鼻-鼻窦表皮葡萄球菌生长量，鼻渊舒口服液具有抗表皮葡萄球菌生物膜的作用。3.激光共聚焦显微镜下可动态观察表皮葡萄球菌生物膜的形成过程。关键词：清胆泄热法；慢性鼻-鼻窦炎；表皮葡萄球菌；细菌生物膜

7、；激光共聚焦显微镜4AbstractObjective:ObservewhethertheStaphylococcusepidermidisisolatedfromthesecretionsofostiomeatalcomplexinnormalhumanand“stagnatedheatofgallbladder”typenasosinusitispatientscanformbacterialbiofilms.TheeffectofBiyuanshuoralliquidonthebiofilmfor

8、mationofStaphylococcusepidermidisinpatientswithchronicrhinosinusitisbeforeandaftertreatmentwasstudiedandtheformationofStaphylococcusepidermidisbiofilmswasobservedbylaserconfocalmicroscopy.Methods:1.Atallof15patientswithchr