基于“精血髓一体论”,研究不同剂量当归补血汤治疗VD大鼠的作用及机制

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1、成都中医药大学2018届硕士研究生学位论文二0一八届硕士研究生学位论文(论文中文题目)：基于“精血髓一体论”，研究不同剂量当归补血汤治疗VD大鼠的作用及机制(论文英文题目)：Basedon"fine-blood-marrowonetheory"，exploretheeffectandmechanismofdifferentdosesofDangguiBuxueDecoctiononVDrats研究生姓名：付白雪指导教师：杨东东学科专业：神经内科二○一八年五月1成都中医药大学2018届硕士研究生学位论文学位论文基于“

2、精血髓一体论”，研究不同剂量当归补血汤治疗VD大鼠的作用及机制Basedon"fine-blood-marrowonetheory"，exploretheeffectandmechanismofdifferentdosesofDangguiBuxueDecoctiononVDrats付白雪指导教师姓名：杨东东申请学位级别：硕士专业名称：神经内科论文提交时间：2018年4月论文答辩时间：2018年5月二○一八年五月1成都中医药大学2018届硕士研究生学位论文中文摘要【目的】：本研究基于“精-血-髓一体理论”，即血既能

3、滋养肾精，以精化髓，又能直接入颅充养脑髓。实验研究选择血管性痴呆动物大脑海马CA1区为观察区域，以星形胶质细胞形态、数量变化及缺血区微血管新生密度改变为具体观察指标，通过研究VD模型大鼠学习记忆能力、脑组织形态学、GFPA表达免疫阳性细胞数目、微血管新生变化与不同当归补血汤治疗剂量的关系，来论释当归补血汤治疗血管性痴呆的现代生物学基础，并寻找当归补血汤治疗血管性痴呆的最佳量效点，为进一步推广“精-血-髓一体论”的临床应用寻找理论依据及科学支撑。【方法】：选用雄性SD大鼠为实验对象，以改良后Pulsinelli四血管

4、阻断法（4-vo）进行血管性痴呆造模。术后七天观察模型大鼠行为表现并按神经功能缺损程度进行评分，剔除造模失败及神经损伤过重无法完成实验者，其余选取进入实验。实验分为正常组、假手术组、VD模型组、VD模型+低剂量当归补血汤组、VD模型+中剂量当归补血汤组、VD模型+高剂量当归补血汤组。根据实验需要进行使用不同药物及剂量，每日灌胃一次，共干预90天，行Morris水迷宫试验检测各组大鼠行空间认知能力改变。水迷宫后提取各组大鼠脑组织。以苏木精-伊红（HE）染色，于光镜下观察脑组织形态学；对血管内皮细胞标志物第Ⅷ因子进行免

5、疫组化染色观察脑组织缺血灶周围微血管密度；应用免疫荧光标记技术检测各组大鼠海马区GFAP（胶原纤维酸性蛋白）表达免疫阳性细胞数目。对不同剂量下的各项指标进行比较，观察当归补血汤剂量对各项指标改变程度的影响，分析当归补血汤改善VD大鼠学习记忆能力的原因。【结果】1、Morris水迷宫行为学测试结果：水迷宫逃避潜伏时间，各VD、VD模型+当归补血汤组与假手术组比明显延长，差异显著（P<0.01）；正常组与假手术组相比无差异（P>0.01）；；全部VD模型+当归补血汤组与VD模型组相比明显缩短，差异显著（P<0.01）；

6、VD模型+高剂量当归补血汤组与VD+中剂量、VD+低剂量组相比，时间依次缩短，差异显著（P<0.01）；2、形态学观察：正常组及假手术组海马CA1区神经元的细胞形态、分布正常,几乎无变性、坏第1页成都中医药大学2018届硕士研究生学位论文死神经元。VD模型组，及各剂量当归补血汤组CA1区可见噬神经现象，凋亡神经元及星形胶质细胞增生。3、GFAP表达免疫阳性细胞计数结果VD模型组，VD模型+各剂量当归补血汤组与正常组、假手术组相比，其GFAP表达数目明显增高，差异显著（P＜0.01）。VD模型组与VD模型+低剂量当归

7、补血汤组比较GFAP表达数目无明显差异（P＞0.01）。VD模型组，VD模型+中剂量当归补血汤组，VD模型+高剂量当归补血汤组，GFAP表达数目依次增加，各组间差异显著（P＜0.01）。正常组与假手术组无明显差异（P＞0.01）。4、缺血脑组织微血管密度检测结果：VD模型组，VD模型+各剂量当归补血汤组与正常组、假手术组相比，微血管密度增高，差异显著（P＜0.01）。VD模型组与VD模型+低剂量当归补血汤组比较微血管密度无明显差异（P＞0.01）。VD模型组，VD模型+中剂量当归补血汤组，VD模型+高剂量当归补血汤

8、组，缺血灶及周边组织微血管密度依次增加，各组间差异显著（P＜0.01）。正常组与假手术组无明显差异（P＞0.01）。【结论】：1、当归补血汤可有效改善VD大鼠的学习记忆能力，其改善作用与用药剂量相关，并在一定范围内随剂量增加而提高，本实验中，以1.08g/kg·d剂量的当归补血汤改善血管性痴呆大鼠学习记忆能力效果最好。2、当归补血汤可增强缺血组织周围血管新生