基于dl-蛋氨酸拆分及氨基酰化酶的固定化研究

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1、湖北工业大学硕士学位论文DL-蛋氨酸拆分及氨基酰化酶的固定化研究姓名：谭圣君申请学位级别：硕士专业：化学工艺指导教师：邵友元20080501湖北工业大学硕士学位论文摘要本文对氨基酰化酶I的提取、应用氨基酰化酶拆分DL蛋氨酸及氨基酰化酶的固定诧进行了研究。重点研究7氨基酰化酶l提取工艺及酶鳇酶学性质、氨基酰化酶I拆分DL．蛋氨酸实验中各因素对拆分率的影响，并对海藻酸钙凝胶珠包埋氨基酰化酶固定化进行了初步探讨研究，为氨基酸工业化生产，尤箕是蛋氨酸的酶法生产提供了理论依据。蛋氨酸酰化实验研究了温度、溶剂、pH值、时间等因素对酰化率的影响，

2、通过正交试验褥出po蛋氨酸酰纯最优工艺条件为：蛋氨酸与乙酸酐的摩尔比为l：1．05，反应的pH值6．2左右、反应温度在62℃，反应时问1．5h，蛋氨酸酰化率为97．5％左右。实验选取氨基酰化酶含量较为丰富的猪肾作为酶源，通过粗提(水作溶剂)、调pHf涂杂蛋白和硫酸铵盐析等步骤从猪肾中提取氨基酰化酶I，测得该酶的比活力为286U触g，蛋邑质含量为4。2搬咖L，纯化倍数为19。l，回收率52％，最适磷为7．O～8．0，最适反应温度随着作用时问的延长而降低。实验采用游离猪肾氨基酰化酶l对N．乙酰．DL．蛋氨酸进行拆分研究，分别考察了pH、

3、温度、酶的用量及底物浓度、金属离子浓度等对拆分率的影响。得出N-乙酰．DL．蛋氮酸拆分最优化条件：反应温度37℃，缓冲体系pH7．O，初始底物N．乙酰．Db蛋氨酸的浓度为O．2艄ⅣL，酶用量7∞l，佃mol。产品，b蛋氨酸：％o．P=96。2‰收率73．5％；D．蛋氨酸：％O．P印5．3％，收率49．5％。实验采用固相漕旋方法对》蛋氨酸进行消旋研究，研究中分剐考察了母液浓缩程度、反应温度、溶液pH值、加入醋酐量、反应时间等对消旋率的影响，在最优消旋工艺条件下，D．蛋氨酸的消旋收率可达到85％左右。实验初步探讨了氨基酰化酶固定化工艺，

4、研究发现固定化氨基酰化酶在50～70℃范围内都保持了较高的酶活力，其热稳定性远远高于游离酶，同时酶的泄漏问题也得到了较好的解决，但是随着反应次数的增加，微胶囊的操作稳定性随之下降。在应用之前，还需解决微胶囊的易损坏问题。关键词：氨基酸，蛋氨酸，氨基酰化酶I，手性拆分，酶固定化湖北工业大学硕士学位论文Abs心凌e童Theextractionofamino∞vl硒ei，me糟solutionofDL-methionineandthe主lnlnobiliztionofaminoa·cvlaselwerestudiedinthedissIe

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