乌骨藤粗提物C21甾体抗肝癌作用机制体外研究

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1、温州医科大学硕士学位论文分类号：R6单位代码：10343学号：151001216硕士学位论文论文题目:乌骨藤粗提物C21甾体抗肝癌作用机制体外研究研究生姓名郑宇学科专业外科学类型专业型指导教师张威二O一八年五月1温州医科大学硕士学位论文论文题目:乌骨藤粗提物C21甾体抗肝癌作用机制体外研究答辩委员会主席：叶再元教授浙江省人民医院答辩委员会成员：马烽教授中国医学科学院周蒙滔教授温州医科大学附属第一医院论文答辩日期：2018年5月27日2温州医科大学硕士学位论文目录中文摘要……………………………………………………………………………………………..4英文摘要……………

2、……………………………………………………………….……………….6引言……………………………………………………………………………………………………..8第一部分1.材料与设备………………………………………………………………………………..92.实验方法与步骤………………………………………………………………………103.结果………………………………………………………………………………………….12第二部分1.材料与设备………………………………………………………………………………132.实验方法与步骤………………………………………………………………………133.结果

3、………………………………………………………………………………………….14第三部分1.材料与设备………………………………………………………………………………162.实验方法与步骤………………………………………………………………………183.结果………………………………………………………………………………………….20讨论……………………………………………………………………………………………………22结论……………………………………………………………………………………………………27参考文献……………………………………………………………………………………………28

4、致谢……………………………………………………………………………………………….....32综述…………………………………………………………………………….……………………..33参考文献…………………………………………………………………………………………..373温州医科大学硕士学位论文乌骨藤粗提物C21甾体抗肝癌作用机制体外研究中文摘要目的：通过观察不同浓度的乌骨藤粗提物（marsdeniatenacissimaextract,MTE）C21甾体对肝癌细胞Bel7402、HepG2增殖、凋亡情况的影响，并从Hippo-YAP和PI3K-AKT-mTOR信号通路

5、来研究探讨C21甾体抗肝癌作用机制。方法：采取新型四氮唑盐还原法（methyltetrazoliumsalt,MTS）检测不同浓度C21甾体（0，40,80,160,320μg/ml）对肝癌细胞Bel7402、HepG2增殖的影响；采用流式细胞术（flowcytometry,FCM）检测C21甾体对肝癌细胞Bel7402、HepG2凋亡的影响；采用Westernblot检测C21甾体协调通过Hippo-YAP和PI3K-AKT-mTOR信号通路抑制肝癌细胞Bel7402、HepG2生长作用机制研究。结果：①与空白对照组相比，用一系列浓度的C21甾体处理24或48

6、h后，Bel7402、HepG2细胞增殖明显受到抑制（P<0.05），且生长抑制率呈明显剂量依赖关系,浓度范围为20-320μg/ml；C21甾体对Bel7402细胞具有更高的细胞毒性，IC50值在24小时和48小时分别为118.8和100.6μg/ml。而在HepG2细胞中，IC50值在24小时和48小时分别为139.5和107.4μg/ml。②C21甾体能明显诱导Bel7402、HepG2细胞早期和晚期凋亡。用C21甾体（浓度为80和160μg/ml）处理后，Bel7402细胞中总凋亡细胞的百分比如下：24小时分别为3.25±1.3％，6.78±0.41％，

7、48小时分别为7.06±0.63％，14.28±0.78％。HepG2细胞中总凋亡细胞的百分比如下：24小时分别为1.36±0.1％，3.13±0.27％，48小时分别为5.34±0.57％，8.89±0.45％。③用C21甾体处理后，总YAP在Bel7402和HepG2细胞中表达水平显著降低，磷酸化YAP和PTEN蛋白表达显著上升（P<0.05）。与对照组相比，总的AKT和PI3K表达水平无明显变化，磷酸化AKT和PI3K呈显著下调（P<0.05）。结论：乌骨藤粗提物C21甾体在体外具有较强的抗肿瘤作用，其能够显著抑制肝癌细胞增殖并促进其凋亡。C21甾体通过上

8、调p-YAP、PTEN及