a20基因及as2o3对口腔腺样囊性癌细胞株acc的作用机制研究

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1、博士学位论文（同等学力人员）A20基因及As2O3对口腔腺样囊性癌细胞株ACC的作用机制研究THESTUDYOFTHEEFFECTSOFA20ANDAs2O3ONADENOIDCYSTICCARCINOMACELLLINES-ACC张斌2010年3月-I-国内图书分类号：X18学校代码：10213国际图书分类号：628密级：公开工学博士学位论文(同等学力人员)A20基因及As2O3对口腔腺样囊性癌细胞株ACC的作用机制研究博士研究生：张斌导师：杨谦教授申请学位：工学博士学科：环境科学与工程所在单位：

2、哈尔滨医科大学附属第二医院答辩日期：2010年3月授予学位单位：哈尔滨工业大学-I-ClassifiedIndex:X18U.D.C:628DissertationfortheDoctoralDegreeinEngineering（EqualCompetencyStaff）THESTUDYOFTHEEFFECTSOFA20ANDAs2O3ONADENOIDCYSTICCARCINOMACELLLINES-ACCCandidate：BinZhangSupervisor：Prof.QianYangAca

3、demicDegreeAppliedfor：DoctorofEngineeringSpeciality：EnvironmentalScienceandEngineeringAffiliation：SecondAffiliatedHospitalofHarbinMedicalUniversityDateofDefence：March,2010Degree-Conferring-Institution：HarbinInstituteofTechnology-I-摘要摘要随着近几年环境污染的日益加重，腺样

4、囊性癌(adenoidcysticcarcinoma,ACC)的发病率呈逐年递增趋势。腺样囊性癌是发生在口腔颌面部常见的恶性肿瘤，其十年生存率仅为10%，其治疗和预防是近年来临床研究的重点。本课题主要研究A20及As2O3对ACC细胞株的作用机制，进一步阐明ACC发生转移及凋亡的原因，为临床生物学及化学治疗ACC提供理论基础。为了筛选出ACC转移相关的基因，通过对口腔临床腺样囊性癌高/低转移细胞株ACC-M/ACC-2做基因芯片分析，重复20次后，得到表达有显著差异的基因：升高表达23条，下降表达4

5、3条。经信号通路相关因子分析得出：口腔腺样囊性癌的转移性高低与NFκB信号通路(nuclearfactorΚBsignalpathway)的激活情况高度相关，相关基因分别为：NFΚB1(P50),NFΚBIA,NFκB3(P65),NFκB2,IκBE,IκKα,A20,ICAM1等8条基因。本研究选取A20基因进一步研究。本研究体外构建人A20基因真核表达载体pEGFP-N3-A20，将其转染ACC-2细胞，验证A20基因对低转移细胞系ACC-2生物学行为的影响。结果显示A20基因对腺样囊性癌细胞

6、系ACC-2的生长起抑制作用；A20基因对NFκB信号通路起抑制作用，并抑制NF-κB的激活；A20基因可以降低ACC-2细胞的转移侵袭能力；A20基因主要通过减少P65蛋白在细胞核中的表达从而抑制了NF-κB信号通路的激活，可能是影响ACC-2以上生物学行为的靶点。应用不同浓度的As2O3作用于ACC-M、ACC-2细胞后，观察As2O3对两种细胞生长状态的影响。结果显示，As2O3抑制ACC细胞的生长，并促进细胞凋亡；As2O3可通过促进细胞凋亡使体外培养的ACC-2细胞生长受抑制，而受抑制AC

7、C-2内SurvivinmRNA和蛋白表达均下降；As2O3对人腺样囊性癌ACC-2裸鼠移植瘤有明显抑制作用，与常规化疗药5-Fu相比效果更明显，其作用机制可能为降低Ki-67表达，抑制肿瘤细胞增殖活性；降低VEGF表达及MVD值，抑制肿瘤血管生成；下调Survivin基因的表达，诱导肿瘤细胞凋亡。通过以上实验，证实了A20基因可以抑制ACC细胞的增殖和转移，其具体机制是通过抑制NF-κB信号通路的激活；As2O3抑制ACC细胞的生长，主要是通过诱导细胞凋亡实现的，其机制可能是：1.线粒体内膜的通透

8、性增加，继而线粒体跨膜电位下降，促凋亡因子与调亡诱导因子（AIF）自线粒体释放入胞浆，并激活Caspase-3,导致细胞凋亡的发生；2.SurvivinmRNA和蛋白表达-I-哈尔滨工业大学工学博士学位论文下降。关键词：A20；NF-κB；环境污染；口腔腺样囊性癌；三氧化二砷-II-AbstractAbstractAsenvironmentalpollutionisincreasinginrecentyears,adenoidcysticcarcinoma(adeno