鸭细胞因子克隆表达及elisa检测方法的建立

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1、CLoNINGANDEXPRESSIONOFDUCKCYToⅪNESANDDEVELoMENToFELISAByLiuRuiSupervisedbyProf．YuShengqingAndProf．FanHongjieAThesisSubmittedtomittetoNanjingAgriculturalUniversityInPartialFulfillmentoftheRequirementforTheMasterDegreeofAgronomy(VeterinaryMedicine)CompletedinMay,2013CommencementinJune，2013原创性声明本人郑

2、重声明：所呈交的学位论文，是本人在导师的指导下，独立进行研究工作所取得的成果。除文中已经注明引用的内容外，本论文不包含任何其他个人或集体已经发表或撰写过的作品成果。对本文的研究做出重要贡献的个人和集体，均已在文中以明确方式标明。本人完全意识到本声明的法律结果由本人承担。学位论文惴需鞫虢方3嘶蝴年∥月／日学位论文版权使用授权书本学位论文作者完全了解学校有关保留、使用学位论文的规定，同意学校保留并向国家有关部门或机构送交论文的复印件和电子版，允许论文被查阅和借阅。本人授权南京农业大学可以将本学位论文的全部或部分内容编入有关数据库进行检索，可以采用影印、缩印或扫描等复制手段保存和汇编学位论文

3、。保密口，在——年解密后适用本授权书。本学位论文属于不保密k／(请在以上方框内打“√”)学位论文作者(需亲笔)签名：方＼衙q7,oD年6月f日别叭赫訇弛：一肿川日目录摘要⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯工ABSTRACT⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯．．III第一章文献综述⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯11禽类细胞因子的研究进展⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯．．11．1细胞因子概述⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯．11．2禽类细胞因子基因的克隆⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯11．3细胞因子的分类⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯．．22细胞因子检测⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯

4、⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯72．1生物学检测方法⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯．．72．2免疫学检测方法⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯．．72．3分子生物学检测方法⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯．8第二章鸭IFN-Y、IL-2、TNF-CI克隆、表达及蛋白纯化⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯111材料与方法⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯．121．1材料⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯．．121．2方法⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯．．142结果⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯．．182．1细胞因子的克隆⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯．182．2细胞因子基因的序列分析⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯．

5、．192．3重组原核表达质粒的构建⋯⋯⋯⋯⋯⋯．．⋯⋯⋯⋯⋯⋯222．4重组菌的诱导表达产物鉴定与纯化⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯232．5鸭TNF—Q基因全长序列测定结果⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯．253讨论⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯．26第三章鸭IFN—Y、IL一2、TNF—Q的抗体制备⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯．291材料与方法⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯．．291．1材料⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯．．301．2方法⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯．．312结果⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯．．352．1间接ELISA方法的建立⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯

6、．36鸭细胞因子克隆表达及ELISA检测方法的建立2．2阳性杂交瘤细胞株的建立⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯．．372．3阳性杂交瘤细胞株的稳定检测⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯．372．4小鼠腹水单抗效价的测定⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯．．382．5单克隆抗体的Westernblot分析⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯．382．7单抗亚型鉴定结果⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯．．402．8多克隆抗体效价的测定⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯．412．9多克隆抗体的鉴定⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯．．413讨论⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯．．41第四章鸭IFN-Y抗原捕获ELISA检测方法的建立⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯

7、⋯⋯451材料与方法⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯．451．1试验材料⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯．452结果⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯．472。l抗体的纯化⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯．．472．2最佳抗体包被浓度的确定⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯．．472．3最佳单克隆抗体包被时间的确定⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯．．482．4最佳封闭液的确定⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯．．482．5最佳封闭时间的确定⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯