骨折愈合过程中dgkα、pkc在大鼠脑干和小脑的表达研究

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1、分类号：单位代码：10092密级：学号：20101007骨折愈合过程中DGKQ、PKO在大鼠脑干和小脑的表达研究单位：专业：研究生姓名：河北北方学院基础医学院人体解剖与组织胚胎学王焱导师姓名及职称：贾卫斗教授、吴靖芳教授研究起止日期：2012．5—2013．5提交日期：2013．5河北北方学院J}学位论文使用授权及知识产权归属承诺本学位论文在导师(或指导小组)的指导下，由本人独立完成。本学位论文研究所获的研究成果，其知识产权归河北北方学院所有。河北北方学院有权对本学位论文进行交流、公开和使用。凡发表与学位论文主要内容相关的论文，第一署名单位为河北北方学院，试验材料、原始数据、申报的专利等知识产

2、权均归河北北方学院所有。否则，承担相应的法律责任。导师签研究生签名：工众●一r7y，＼驯3年多月如日研究生学位论文独创性声明本论文是在导师指导下进行的研究工作及取得的研究成果，除了文中特别加以标注和致谢等内容外，文中不包含其他人已经发表或撰写的研究成果，指导教师对此进行了审定。本论文由本人独立撰写，文责自负。聊签锄研究生签名：了六f-"AAD侈年箩月歹p日目录中文摘要⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯．1英文摘要⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯．3英文缩写⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯6研究论文骨折愈合过程中DGKa、PKC在大鼠脑千和小脑

3、的表达研究前圭r-I⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯．．7月U2⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯．．，材料与方法⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯．．8结果⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯．．14附图⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯．．17讨论⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯．．27结论⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯．．⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯30参考文献⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯31综述神经生长因子与骨折愈合⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯．37甘油二酯激酶的潜在功能⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯．4l致谢⋯⋯⋯

4、⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯．52个人简历⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯．53中丈摘要骨折愈合过程中DGKot、PKC在大鼠脑干*n,J,iti氢的表达研究摘要骨折发生后，局部注射神经生长因子町以促进骨折的愈合。甘油二酯激酶(DGK)是细胞内重要的第二信使，参与了多种细胞的生理和病理过程。木研究通过建立大鼠骨折模型，检i)n,UDGKa_jfll蛋白激酶C(PKC)在不同病理阶段的脑干和小脑的蛋白表达、细胞定位和分布变化，探i,J-DGKot在大鼠骨折愈合病理过程中加速骨折愈合的机制。本研究应用SD大鼠制成骨折模型，并设置假手术的正常SD大鼠做对照，根据骨折

5、愈合分期方法与SD大鼠骨折局部组织学变化，将大鼠骨折愈合过程分为三期：早期且lj术后l一3d；中期即术后4—14d；后期即术后15d之后。分别于术后第3，7，14，24，42d各处死1只对照组和5只模型组大鼠。用半定量RT—PCR检测脑干和小脑DGKcc和PKCmRNA的表达变化，用免疫组织化学染色和免疫荧光双标法检测骨折愈合过程中DGK0【和PKC的细胞定位和蛋白的分布变化。结果显示：在早期和中期模型组大鼠脑干和小脑内病理改变以炎性浸润为主，神经元在骨折三期均未发生明显的形态学改变。模型组术后3，7，14d，脑干中DGKOL和PKCmRNA的表达水平高于对照组fP<0．05)。模型组术后3，

6、7，14，24d，小脑中DGKamRNA的表达高于对照组水平fP<0．05)，PKCmRNA在模型组和对照组的表达变化无明显统计学差异(P>o．05)。免疫组织化学染色结果显示，在各骨折天数模犁组和对照组的脑_r中，纤维状结构均呈DGKa反应阳性，在对照组脑十中木见DGKO【阳性细胞出现，模犁组术后3d的脑干内即出现DGK0【阳性细胞，阳性反应位于细胞核周的胞浆内，拿术后7d．f914d，阳性反麻的部位移至整个胞浆内，至模型组术后24d,1142d，细胞均呈DGKa反应阴性。免疫荧光双标法显示，脑干内的DGKot]sn性细胞为神经元。在各骨折天数对照组和模型组的脑十中，纤维状结构均呈PKC反应

7、阳性。对照组未见PKC阳性细胞出现，在模型组，PKC口H性细胞出现予术后3d：f{17d，5Ij。tO_反应位于胞浆，至术后14，24，42d，细胞呈PKC反应阴性。免疫荧光双标结果显／j÷，脑干内可见DGKot、PKC双阳性神经元。在对中文摘要照组和模型组的d、脑中，纤维状结构均呈DGK0l阳性反应。DGKotFH性梨状神经元仪见于模型组术后3，7，14，24d，阳性反席位于胞浆。在对照组和模型