锌指蛋白265在大鼠睾丸sertoli细胞局部感染中的作用研究

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1、上海交通大学医学院2010级硕士学位论文上海交通大学硕士学位论文锌指蛋白265在大鼠睾丸Sertoli细胞局部感染中的作用研究姓名：潘斌专业：免疫学指导教师：李伟毅席晔斌201304251万方数据上海交通大学医学院2010级硕士学位论文锌指蛋白265在大鼠睾丸Sertoli细胞局部感染中的作用研究姓名：潘斌专业：免疫学指导教师：李伟毅席晔斌研究方向：免疫调节及生殖免疫申请学位级别：硕士培养单位：基础医学院基金资助项目：国家自然科学基金项目（81070479）；上海市教委重点项目(09ZZ117)201304252万方数据上海交通大学医学院2010级硕士学位论文T

2、heResearchoftheFunctionofZNF265inRatSertoliCellsDuringInfectionName:BinPanMajor:ImmunologyGuideteacthers:WeiyiLi,YebinXiResearchdirection:ImmunoregulatoryReproductiveimmunologyApplication:MasterdegreeInstitute:BasicMedicineFacultyFundedprojects:NationalNaturalScienceFoundationofChina

3、(81070479)ShanghaiEducationalCommittee(09ZZ117)201304253万方数据万方数据万方数据上海交通大学医学院2010级硕士学位论文锌指蛋白265在大鼠睾丸Sertoli细胞局部感染中的作用研究摘要Sertoli细胞(支持细胞)是睾丸主要的基质细胞，参与血-睾屏障的组成，维持[1,2]调控睾丸局部的免疫豁免。锌指蛋白265(Zincfingerprotein265,ZNF265)[3]是含两个锌指结构及具有丝氨酸/精氨酸富集区的锌指蛋白，目前研究主要认为[4,5]它具有RNA结合功能，和转录、前体mRNA剪切相关。我们

4、在前期的研究中发现，ZNF265在大鼠Sertoli细胞中特异性高表达，且表达量和感染密切相[6]关；而Sertoli细胞可以通过改变IL-1、IL-6及TGF-β等的表达，发挥免疫调[7,8]节作用，增强睾丸局部抗感染的免疫应答。本论文通过慢病毒介导的RNAi技术，沉默Sertoli细胞中ZNF265的表达，观察Sertoli细胞在溶脲脲原体(UreaplasmaUrealyticum，UU)感染后，对IL-1α、IL-6、MCP-1、Toll样受体（TLR2、TLR6）、TGF-β、FasL表达变化及对NF-κB信号通路激活的影响；另外通过染色质免疫共沉淀（

5、ChIP）技术进一步从蛋白质-DNA作用的角度探讨ZNF265在Sertoli细胞中抗感染和免疫调节作用及可能的作用机制。研究结果发现：慢病毒介导的RNAi技术有效的干扰了ZNF265在大鼠Sertoli细胞中的表达。在RNAi后，UU感染的早期，IL-1α、IL-6、MCP-1、TLR2和TLR6表达升高，NF-κB激活增加，TGF-β及FasL表达也升高；而在感染后期，IL-1α、IL-6、MCP-1、TLR2和TLR6表达下调，NF-κB激活减弱，TGF-β及FasL表达仍持续升高且达最高水平。另外通过ChIP分析发现，ZNF265蛋白与TGF-β及Fas

6、L的启动子区域结合，并且TGF-β及FasL在RNAi组的表达水平，较无RNAi组明显升高。上述结果表明：ZNF265在Sertoli细胞中发挥了重要的抗感染功能，可能通过和TGF-β及FasL相互作用，在Sertoli细胞免疫调节中共同发挥重要作用。关键词：ZNF265,Sertoli细胞,RNAi,TGF-β,FasL,ChIP6万方数据上海交通大学医学院2010级硕士学位论文TheResearchoftheFunctionofZNF265inRatSertoliCellsDuringInfectionAbstractSertolicellisthemain

7、matrixcellintestis,consistingofblood-testisbarrier,[1,2]maintainingandregulatingtheimmuneprivilegeoftestis.ZNF265isa[3]newlyidentifiedarginine/serine-rich(SR)protein,studieshaveshownthatZNF265proteinsareco-immunoprecipitatedwithmRNAsandcolocalizewiththesplicefactors,SMN,U1-70K,U2AF35

8、andSC35,indi