谷氨酸转运体glast在小鼠视网膜兴奋性损伤后的表达

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1、谷氨酸转运体BLAST在小鼠视网膜兴奋性损伤后的表达摘要目的：本实验在NMDA(N一甲基一D天门冬氨酸)所致小鼠视网膜兴奋性损伤中，观察谷氨酸转运体GLAST的蛋白表达量和mRNA随时问表达量的变化，探讨BLAST对神经节细胞凋亡的作用。方法：本实验采用健康清洁级4-8周龄C57BL／6J小鼠共54只，雌雄各半，体重约20—309，随机分成A、B、C三组，A组6只为J下常对照组，B、C为实验组各24只，其中B组为NMDA兴奋性损伤组，C组为空白对照组。B组、C组于造模后6h、24h、3d和7d四个时间点处死。处死前对每组小鼠进行暗适应，至少暗适应6小时，然后进行视网膜电生理(

2、ERG)检查。ERG操作完毕处死动物，取每只小鼠左眼眼球做病理切片，进行HE染色、免疫组织化学及TUNEL凋亡细胞染色，右眼眼球取完整视网膜用Taqman荧光定量RT-PCR法检测视网膜中谷氨酸转运体GLASTmRNA随时问表达变化，以及与正常组比较表达差异。结果l、HE染色：(1)NMDA兴奋性损伤组：造模后6h，与正常对照组比较未见明显差异，造模后24h，视网膜的神经节细胞层开始出现凋亡形态细胞，3d凋亡细胞增多并且神经节细胞数目逐渐减少，7d兴奋性损伤组神经节细胞的数目更少，而且内丛状层变薄，与正常组比较差异有统计学意义(P<0．05)。(2)PBS空白对照组：与正常对

3、照组比较四个时间点均未见明显异常，差异无统计学意义(P>0．05)。2、视网膜电生理(ERG)检查：造模后3、7天，(1)NMDA实验组：与正常对照组比较，在标准混合反应中b波波幅显著下降，差异显著有统计学意义(P<0．05)。(2)PBS空白对照组：与正常组比较没有明显差异(P>0．05)。3、TUNEL凋亡细胞染色：(1)NMDA实验组：四组神经节细胞层都可以见到红染的凋亡细胞，24h组凋亡细胞数量最多，与正常组比较差异有统计学意义(P<0．05)。(2)PBS空白对照组：偶见少量凋亡细胞，与正常组比无统计学意义(P>0．05)。4、免疫组织化学：三组中都能见到GLAST

4、蛋白的表达，正常组与PBS组可见GALST蛋白分布在视网膜全层，且主要分布在内外丛状层。NMDA组：四个时间点GLAST蛋白表达都明显减少。3、7d组能见到GALST蛋白在内丛状层、神经节细胞层的浓度要明显高于其他各层。5、Taqman法荧光定量RT—PCR：(1)NMDA组：与正常组比较GLAST的mRNA农达显著下调，差异具有统计学意义(P<0．05)。(2)PBS组：与正常组比较未见明显差别。结论：1、玻璃体腔注射NMDA制作动物视网膜兴奋性损伤模型简便易操作、可重复性强，无论从形态学还是功能上都证明其可以用做理想的青光眼动物模型。．，2、GLAST蛋白、mRNA表达下

5、调，而神经节细胞存活率也下降，这说明GALST表达减少可能加重了神经节细胞的损伤。3、GLAST蛋白表达发生了位置的重新分布，可能是一种自我保护的代偿机制。关键词：谷氨酸；谷氨酸转运体：GLAST；视神经保护；神经节细胞TheexpressionoftheGlutamatetransporterGLASTinthemouses’retinaafterexcitiotoxicinjuryAbstractObjectivepurposeofthisexperimentisconducttostudywhetherglutamatetransporterGLASTchangesoc

6、curwiththemodleofretinaexcitotoxicinjuryinthemouse．MethodRetinaexcitotoxicinjurywasinducedinoneeyesof54adultC57BJ／6LmousesbyinjectNMDA(N—methyl—Daspartate)tointravitreal．Therewere3groups，thenormalgroup(6eyes)、thecontrolgroup(24eyes)andtheexperimentalgroup(24eyes)．Thenormalgroupweretooktheno

7、rmaleyesdirectly，andthelasttwogoupswerecompared6h、24h、3dand7dafterinjury．GLASTwasstudiedbyimmunohistochemistryandTaqManRealtimequantitativePCRanalysis．TheretinaexcitotoxicinjurywereasseaaedbyHEstain、TUNELstainandERGanalysis．ResultsIntravitrealinjectingNM