谷氨酸转运体在高热惊厥大鼠脑内表达和意义

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1、谷氨酸转运体在高热惊厥大鼠脑内表达和意义【摘要】目的探讨大鼠反复高热惊厥后脑内谷氨酸及谷氨酸转运体的表达情况，进行定性及定量分析。方法热水浴法建立FS模型。15日龄雄性Wistar大鼠60只，随机分为正常对照组（n=10）和高热处理组（ri=50）,其中高热处理组按大鼠是否有惊厥又分为高热未惊厥组和高热惊厥组。免疫组织化学法检测谷氨酸及谷氨酸转运体在大鼠脑组织各区的表达。结果①惊厥对照组大鼠皮层及海马CA3区Glu的表达较正常对照组明显增加。②惊厥对照组大鼠皮层及海马CA3区GLT-1的表达均低于正常对照组。讨论高热惊厥时脑细胞谷氨酸表达上升，而脑细胞膜和细

2、胞间质中的谷氨酸转运体GLT-1表达下降。【关键词】高热惊厥；谷氨酸；谷氨酸转运体高热惊厥（febrileconvulsion,FC）是一种特殊类型的癫痫综合征，是小儿时期最常见的惊厥性疾病，但反复发作或长时间发作的FC可造成脑损伤，目前对本病的研究仍集中于对其行为及脑电图变化的观察，而对其神经病理改变的研究较少。本研究用热水浴惊厥模型诱导生后15dWester大鼠发生热性惊厥，利用免疫组织化学方法对正常对照组、高热及高热惊厥组大鼠脑内谷氨酸及谷氨酸转运体的表达情况进行定性及定量分析，为热性惊厥时的神经病理学研究提供新思路1材料与方法1.1实验动物与分组15

3、日龄雄性Wistar大鼠60只，体重30-45g,（购自内蒙古大学实验动物中心）。自由喂养Id后进行实验。将大鼠称重后编号，随机分为正常对照组（37.0°C水浴，n=10）和高热处理组（45.2°C水浴，n=50）,其中高热处理组按大鼠是否有惊厥又分为高热未惊厥组和高热惊厥组。从正常对照、高热未惊厥和高热惊厥组中，分别随机取10只用于进行脑组织免疫组织化学染色观察。1.2化学试剂本实验中所采用的化学试剂及免疫组化试剂盒分别购自北京化学试剂公司及福州迈新生物科技公司。1.3热性惊厥动物模型的建立参照文献报道［1］建立热性惊厥动物模型，高热惊厥组热水浴：水浴箱温

4、度设定为45.21。从大鼠生后15d开始，隔日诱导惊厥1次，共10次。正常对照组水浴温度为37°C,处置方法同高热惊厥组。记录大鼠的惊厥潜伏期、惊厥时体温、惊厥持续时间及惊厥级别评［2］（惊厥分级：0级0分：无惊厥；1级1分：面部抽动；2级2分：点头；3级3分：前肢阵挛抽搐；4级4分:全身强直；5级5分：全身强直阵挛）。1.4脑组织谷氨酸和谷氨酸转运体表达检测1.4.1脑标本取材和切片制备并进行免疫组化染色各组在FC组末次惊厥24h予100g/L水合氯醛（3.5mL/kg）腹腔注射麻醉后，4%多聚甲醛PB左心室灌注固定，取脑，后固定6-8ho脑标本入30%蔗

5、糖磷酸缓冲液（PH=7.4）过夜自头端向尾端连续冻切脑片，厚30um切片，连续取片，三张为一套，分别进行尼氏染色组织定位和Glu及GLT-1免疫组化染色。1.4.2图像结果处理每张切片分别在海马CA3区、颖叶皮层（CTL）随机观察5个不连续视野（X400）,使用Olympus自动图像采集系统进行图像采集，脑片呈现棕黄色区域为阳性反应，用IPP软件分析系统进行计数和平均光密度分析，取其0D值。1.5统计学分析应用SPSS12.0软件进行统计学分析。数据以均数土标准差（x±s）表示，独立样本t检验和单因素方差分析进行组间比较，以P