tnf-α在nmda诱导大鼠视网膜兴奋性损伤中表达

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1、摘要目的：研究NMDA诱导大鼠视网膜兴奋性损伤中TNF一0【的表达规律。方法：健康成年清洁级Wistar大鼠42只，随机分为正常对照组(6只)、PBS组(6只)和NMDA组(30只)。NMDA组所有大鼠均随机取一只眼球玻璃体腔注射2山80mmol／lNMDA制作视网膜兴奋性损伤模型。PBS组大鼠随机取一只眼玻璃体腔注射2plPBS。正常对照组不做任何处理。NMDA组大鼠在玻璃体腔注射后2h，8h，16h，24h，48h处死。HE染色光镜下观察各组视网膜组织的形态学变化，免疫组织化学染色方法观察视网膜TNF．0L表达的变化，实时定量RT-PCR方法观察视网膜TNF一旺mRNA表达的变

2、化。结果：1HE染色：正常对照组和PBS组大鼠视嘲膜组织结构层次清楚，染色均匀，细胞形态规则。NMDA组造模后2h，神经纤维层和神经节细胞开始水肿；造模后8h，水肿最严重，视网膜增厚；造模后16h，水肿较前减轻，排列疏松，形态不规则，数量减少；造模后24h，神经节细胞数目减少，排列紊乱，神经纤维层、神经节细胞层变薄：造模48h，神经节细胞稀少，神经纤维层和神经节细胞层萎缩，视网膜变薄．2免疫组织化学染色：正常对照组及PBS组视网膜未见TNF．a阳性表达。NMDA组造模后2h，TNF．0【的表达量迅速上调(P<0．05)，造模后8h，TNF．a表达量达高峰(P<0．05)，造模后16

3、h表达量降低，但仍高于对照组(P<0．05)。造模后24h，48hTNF．0【表达量与16h无差别(p>0．05)，较正常对照组增多(P<0．05)。TNF．0【阳性表达主要位于神经纤维层、神经节细胞层及内丛状层。3实时定量RT-PCR：正常对照组和PBS组大鼠视网膜未见TNF一旺mRNA表达。NMDA组造模后211,TNF．11mRNA水半较正常对照组上调(P<0．05)，造模后8h，TNF—amRNA水平达高峰(P<0．05)，造模后16h表达量降低，但仍高于对照组(P<0．05)。造模后24h，48hTNF—QmRNA表达量与16h无差别(p>0．05)，较正常对照组增多(P

4、<0．05)。结论：TNF一0【在NMDA诱导大鼠视叫膜兴奋性损伤中表达增加，该因子在视嘲膜兴奋性损伤中可能起重要作用。硕士研究生：刘刚(眼科学)指导教师：王大博教授关键词：N．甲基天冬氨酸；肿瘤坏死因子仅；青光眼TheexpressionofTNF—aonretinalexcitotoxicityinjuryinducedbyNMDAAbstractobiectiveToevaluatetheroleofTNF-aonrat’sretinaexcitotoxicityinjuryinducedbyNMDA．Methods42Wistarratswererandomlydivide

5、dintothreegroups，normalcontrolgroupincluding6rats．PBSgroupincluding6ratsandNMDAgroupincluding30rats．2plofNMDAofconcentrationof80nmol／1wasintravtrealinjectedintotheonerandomeyeofeveryanimaIofNMDAgroupandsamevolumePBSwasintravtrealinjectedintotheonerandomeyeofPBSgroup．Theratsofllo肌alcontrolgroup

6、receivednotreatment．ratsofNMDAgroupweresacrificedat2h，8h,l6h，24h，and48hrandomlyandrespectivelyafterintravtrealinjection．Therats’retinawereHEstainedandobservedunderlightmicroscope．andtheproteinlevelofTNF一位weredetectedbyimmunohistochemistry；TNF．GtmRNAinrats’retinaweredetectedbyReal—Timequantitat

7、ivereversetranscriptionpolymerasechainreaction(Real—TimeRT—PCR)．Results1．HEstaining：Thestructureofretinaofno肌alcontrolgroupandPBSgroupwashistologicallywell．defined，uniforminstaining，andwithregulareellshape．InNMDAgroup，2hafterinjection，m