苦豆子分子标记遗传多样性研究及与苦参碱含量的关联分析

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1、独创性声明本人声明所呈交的论文是我个人在导师指导下进行的研究工作及取得的研究成果。尽我所知，除了文中特别加以标注和致谢的地方外，论文中不包含其他人已经发表或撰写过的研究成果，也不包含为获得宁夏大学或其它教育机构的学位或证书而使用过的材料。与我一同工作的同志对本研究所做的任何贡献均已在论文中作了明确的说明并表示了谢意。研究生签名：洲磁嵩时间：知侣年莎月1日关于论文使用授权的说明本人完全了解宁夏大学有关保留、使用学位论文的规定，即：学校有权保留送交论文的复印件和磁盘，允许论文被查阅和借阅，可以采用影印、缩印或扫描等复制手段保存、汇编学位论文。同意宁夏大学可以用不同方式在不同媒体上发表、传播学位

2、论文的全部或部分内容。(保密的学位论文在解密后应遵守此协议)研究生签名导师签名：：划拔碧肉侪时间：幻『3年‘月f日时间：2—哆年厶月／日删㈣舢IIIIIHIIIIlUlIIIY2385973本研究受国家自然科学基金(30660017)和宁夏大学自然科学基金(NDZRl0-5)资助。摘要本研究以宁夏、新疆、青海、甘肃和内蒙的23个苦豆子居群为材料，通过检测苦参碱、氧化苦参碱的含量，结合SSR标记和自行开发的标记探讨不同苦豆子居群的遗传多样性，分析其亲缘关系及居群分化程度，旨在了解其遗传背景，为野生苦豆子多样性的保护、资源的收集和可持续利用等提供理论依据。研究结果如下：(1)对23份苦豆子种子

3、和叶片中的苦参碱和氧化苦参碱进行检测。结果表明：不同居群间苦参碱和氧化苦参碱含量有差异，其含量的变异系数均在30％以上。叶片中苦参碱的含量是种子中苦参碱含量的2．12倍，种子中氧化苦参碱的含量是叶片中的5．36倍。施氮对苦豆子叶片苦参碱和氧化苦参碱含量均有提高作用，其中对氧化苦参碱含量的提高达到极显著水平。(2)建立并优化了适合苦豆子SSR标记的最佳反应体系(10儿)：DNA模板20ng：Taq酶0．5U；10XBufferl札：MixedPrimer19mol·L一：M92+2．5mmol·L～：dNTP0．2mmol·L～。(3)从30对大豆SSR引物中筛选出18对重复性好且扩增清晰的

4、引物，共检测出409个位点，其中多态性位点397个，Nei’s遗传多样性指数(H)为0．2709，Shannon信息指数(I)为0．4150，遗传距离变幅为0．0883—0．2702。UPGMA聚类结果表明23个苦豆子居群聚为6类。遗传分化分析系数为0．4168，表明苦豆子居群间的遗传分化较火。(4)通过NCB!网站检索苦豆子近缘植物和拟南芥的相关序列，自行开发新的标记，从中筛选到18对重复性好且扩增条带清晰的引物，共检测出257个位点，其中多态性位点214个，Nei’S遗传多样性指数(H)为0．3096，Shannon信息指数(1)为0．4581，遗传距离变幅为0．2261—0．5451

5、。UPGMA聚类分析表明，23个苦豆子居群聚为4类。(5)两类引物的PCR扩增结果均反映苦豆子的遗传多样性水平较高，Mental测验显示，各居群间遗传距离与地理距离无赢接的关系。(6)两类标记筛选出的36对引物中共有38个位点与种子苦参碱含量、种子氧化苦参碱含耸、叶片苦参碱含量、叶片氧化苦参碱含量4个性状相关联，与苦豆子种子苦参碱含量关联的位点最多，达到19个，其中36D3位点解释率达O．51，与叶片中氧化苦参碱含箭关联的位点有13个，其中位点13D15的解释率达0．48。关键词：苦豆子，分子标记，遗传多样性，苦参碱，关联分析AbstractBasedon23Sophoraalopecur

6、oidesLgermplasmresourcesfromNingxia，Xinjiang，Qinghai，Gansu，andInnerMongolianinChina，geneticdiversity，geneticrelationshipandgeneticdifferentitiationweredetectedinourresearchbycharacterisingmatrinecontent，oxymatrinecontent，SSRandself-designedmolecularmarkeranalysisinordertostudytheirgeneticbackgroun

7、dandprovidesometheoreticalevidenceforscientificallyutilizationofSalopecuroidesL．reSOUrCeS，includingitsprotectionandcollection．Theresultswereasfollows：(1)Theanalysisofmatrinecontentandoxymatrinecontentinseedandlea