胱胺治疗小鼠局灶性缺血性脑卒中模型的实验研究

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1、学校代码：褒：６ＵＤＣ１６学号：１０９６１１博士学位论文胱胺治疗小鼠局灶性缺血性脑卒中模型的实验研究研究生姓名：李沛城导师姓名：滕皋军教授申请学位类别医学傅士学位授子单位东南大学一２０级学科名称临床医学论文答辩日期１７年０９月０６日二级学科名称影像医学与核医学学位授予日期年月日＿答辩委Ｍ会主席卢光明教授评阅人２０１７年０９月０６曰豪兩大净博士学位论文胱胺治疗小鼠局灶性缺血性脑卒中模型的实验研究．专业名称：影像医学与核医学研宄生姓名：李沛城导师姓名

2、：滕皋军本论文获国家９７３计划项目（２０１３ＣＢ７３３８００）、国家自然科学基金重点项目（８１２３００３４）和江苏省２０１１年度普通高校研究生科研创新计划项目（ＣＸＺＺＪＨ７８）资助。ＣＹＳＴＡＭＩＮＥＥＦＦＥＣＴＩＶＥＬＹＰＲＯＭＯＴＥＳＦＵＮＣＴＩＯＮＡＬＲＥＣＯＶＥＲＹＡＦＴＥＲＩＳＣＨＥＭＩＣＳＴＲＯＫＥＩＮＭＯＵＳＥＭＯＤＥＬＡＤｉｓｓｅｒｔａｔｉｏｎＳｕｂｍｉｔｔｅｄｔｏＳｏｕｔｈｅａｓｔＵｎｉｖｅｒｓｉｔｙＦｏｒｔｈｅＡｃａｄｅｍｉｃＤｅｇｒｅｅｏｆＤｏｃｔｏｒｏｆ

3、ＭｅｄｉｃｉｎｅＢＹＬＩＰｅ－ｉＣｈｅｎｇＳｕｐｅｒｖｉｓｅｄｂｙＰｒｏｆｅｓｓｏｒ－ＴＥＮＧＧａｏＪｕｎＳｃｈｏｏｌｏｆＭｅｄｉｃｉｎｅＳｏｕｔｈｅａｓｔＵｎｉｖｅｒｓｉｔｙＳｅｐｔｅｍｂｅｒ２０１７东南大学学位论文独创性声明本人声明所呈交的学位论文是我个人在导师指导下进行的研宄工作及取得的研宄成果。尽我所，，知，除了文中特别加以标注和致谢的地方外论文中不包含其他人己经发表或撰写过的研究成果也不包含为获得东南大学或其它教育机构的学位或证书而使用过的材料一。与我同工作的同志对本研究所做

4、的任何贡献均己在论文中作了明确的说明并表示了谢意。＾研究生签＾日期：个＾＇东南大学学位论文使用授权声明东南大学、中国科学技术信息研宄所、国家图书馆有权保留本人所送交学位论文的复印件和电子文档，可以采用影印、缩印或其他复制手段保存论文。本人电子文档的内容和纸质论文的内容相一，致，可以公布（包括以电子信息形式刊登）。除在保密期内的保密论文外允许论文被查阅和借阅论文的全部内容或中、英文摘要等部分内容。论文的公布（包括以电子信息形式刊登）授权东南大学研宄生院办理。。研究牛签＾＾导师签日期：＇丨》ｄ＼＾中文摘要中

5、文摘要一第部分：神经干细胞的体外培养、诱导分化及胱胺干预实验研宄（Ｎｔｌ，ＮＳ）目的：探讨新生小鼠海马来源神经干细胞ｅｕｒａｌｓｅｍｃｅｌｓＣｓ的体外分离、培养、一诱导分化及鉴定的方法，为进步胱胺药物体外干预实验提供细胞来源。观察胱胺对神经干细胞增殖分化及对神经细胞分泌表达脑源性神经营养因子（Ｂｒａｉｎｄｅｒｉｖｅｄｎｅｕｒｏｔｒｏｐｈｉｃｆａｃｔｏｒ，ＢＤＮＦ）的景多响。材料和方法：从新生Ｃ５７ＢＬ／６Ｊ小鼠大脑分离海马组织，采用机械吹打获取单细胞悬液，通过悬浮培养并利用细胞生长因子诱导获得ＮＳＣｓ，从细胞

6、形态、细胞免疫荧光染色分析细胞表面标志物Ｎｅｓｔｉｎ鉴定ＮＳＣｓ。将培养至第四代的ＮＳＣｓ进行贴壁培养诱导其向－，ｔｕｂ神经细胞分化从细胞形态、免疫荧光染色分析神经元细胞表面标志物Ｉｌｌｕｌｉｎ、胶质细胞表面标志物ＧＦＡＰ鉴定诱导分化的细胞。对神经干细胞行贴壁培养，在培养液中加入胱胺，通过细胞计数及免疫荧光染色观察胱胺对神经千细胞增殖分化的影响。通过ＥＬＩＳＡ和ＷＢ分别检测细胞培养上清液及神经细胞中ＢＤＮＦ的分泌表达。结果２４ｈ－：小鼠海马来源的ＮＳＣｓ在无血清祌经干细胞培养基中悬浮培养后可见３５个ＮＳＣｓ形成细胞团，呈

7、亮球状。培养５ｄ后，细胞球急剧增殖，聚集成典型神经球。细胞－传代后其生长形态与原代细胞相似，３５天可形成典型神经球４。培养至第代的神经干细胞球行细胞免疫荧光染色，显示ＮＳＣｓ特异性标志物巢蛋白（Ｎｅｓｔｉｎ）。将ＮＳＣｓ诱导－Ｊ３Ｉｌｌｔｕｂｕｌｉｎ、ＧＦＡＰ５分化后细胞免疫荧光染色显示阳性率分别为．２％、９３．５％。胱胺促进神经干细胞的增殖及向神经元细胞分化，增加诱导分化的神经细胞ＢＤＮＦ的分泌表达水平。结论：成功从新生小鼠海马组织分离培养出ＮＳＣｓ，通过鉴定，该细胞具有神经千细胞的标志特性，具有多功能分化潜能，能够

8、诱导分化为祌经元、星形胶质细胞等主要神经ＢＤＮＦ的细胞。胱胺增加神经细胞分泌表达水平，促进神经干细胞增殖及向神经元细胞