大鼠局灶性脑缺血模型制备及取脑方法实验研究

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1、大鼠局灶性脑缺血模型制备及取脑方法实验研究【摘要】目的：研究ethods:Afterexposureandligationofthemoncarotidartery(CCA)andtheexternalcarotidartery(ECA),thepterygopalatinearterythemoncarotidartery.Atdefinedtimetheratheart,andthentheratbrainptomsandpathologicalmanifestationsafterthesurgery.Notperfusingfix

2、ativesolutionfromtheheart,thehistologicalanatomyshapefailedtoremainperfusionoffixativesolutionkeptbetterexamplecortexandhippocampus,buttheatterandthegraymatterofthehiddenpoorlyremained;longtermperfusioncouldbuttookmuchtimeandusedlotsofsolution,soabettereffectcouldbeachiev

3、edfromthestudyongraymatterofthehiden.Conclusion:Thismethodisreliableandeasytooperate,sforattention.Themethodofdraperfusingfixativesolutioncanbeusedtostudythecortexandhippocampus'ischemicalreperfusioninjury.Tostudythegraymatterofthehidden,itisnecessaryandacceptabletotakelo

4、ngtermperfusing.　　Keyicalreperfusioninjury;Animalmodel;Brain　　目前国内外采用的大鼠大脑中动脉脑缺血动物模型的制备方法有很多，最常用的便是线栓法。线栓法是Keizumi等[1]首先于1986年采用的不开颅经颈总动脉插入尼龙线导致大脑中动脉闭塞获得成功，随后在1989年，Longa对这种方法加以改进后广泛用于实验性脑缺血研究[2]，但目前有许多实验室报告有较大的差异，而且实验中的取材方法对实验结果影响报道甚少。我们在实验中采用了Longa改进线栓法，结合实验过程和多次的大鼠解剖观察

5、，分析模型制作过程的关键环节和注意事项，并对影响制备此模型的影响因素进行了探讨和归纳，以指导实验的标准化操作过程，并结合大鼠解剖学知识和死体解剖观察，研究标准化的心脏灌注固定操作方法。　　1材料与方法　　1.1实验动物成年清洁级m日本产钓鱼线，打磨掉其头部的棱角，蘸熔化硬蜡(熔点在60℃以上)，在需要长度(距头端20mm)处标记，将此线浸泡消毒，临用前用无菌生理盐水浸泡，再将头端浸于无菌37℃肝素盐水中备用。　　1.3动物麻醉及消毒乙醚诱导麻醉后腹腔注射10%水合氯醛0.3mL/100g复合麻醉，背部皮下注射阿托品抑制粘液腺分泌。手术器械

6、消毒备用，动物手术部位去毛并无菌处理，手术过程严格无菌操作。　　1.4手术步骤(1)颈前正中切口，分离右侧颈总动脉(CCA)及颈外动脉(ECA)并暴露CCA分叉及颈内动脉(ICA)起始端，ECA以1号手术缝合尼龙线结扎;(2)距分叉1.5cm处结扎CCA;(3)ICA下穿“线夹”(即穿线两头交叉不打结，用两把止血钳牵拉)暂时夹闭ICA以防止血液逆流出血;(4)在CCA结扎线与分叉之间备线打单结，避免碰到颈动脉窦，在CCA备线近心侧剪一小口穿入线栓，待线栓头端至ICA起始端被“线夹”挡住不能进入，此时打紧CCA备线单结，松开“线夹”，继续穿

7、线栓入ICA(图1)[2];(5)线栓穿入方向为向头端偏内侧，这样可避免穿入翼颚动脉(如误入翼颚动脉处理见后)，至线栓标记到分叉处时感穿线栓有阻力即插线栓成功;(6)进一步打紧CCA备线结扎紧线栓，以防不慎将其拔出或进一步插入导致不良后果，线栓在CCA外露约1.0cm即可;(7)再灌注组于术后2小时再次麻醉打开切口，直视下抽出线栓约1cm。假手术组只结扎CCA不导入线栓。　　术中注意事项：(1)操作轻柔避免损伤过多组织，严格无菌操作。(2)清楚地分离血管和神经，避免损伤和结扎神经。(3)误入翼颚动脉时的判断:不能顺利插入线栓至标记，转动线

8、栓有阻力，线栓尾端向内偏;处理及注意事项：退出线栓头端至ICA入口时重新插入;总插线过程时间不宜过长，以防动脉血栓形成。插线不宜用力过猛，防止穿破血管造成蛛网膜下腔出血。　　1.5术后评分术后