线栓法制备大鼠局灶性脑缺血模型的研究基

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1、线栓法制备大鼠局灶性脑缺血模型的研究基【关键词】脑缺血大鼠线栓法MCAO随着当今社会的老龄化，人类脑血管病的发病率日益增加，我国每年新发脑卒中病例超过200万，每年死于脑卒中者约150万，生存的脑卒中患者目前多达700万。其中缺血性脑血管病占80%以上［1］，而大脑中脉闭塞(MCAO)占血管闭塞的43%［2］，因此制备一种较理想的脑缺血再灌注动物模型是研究脑血管病的重要手段及前提条件。局灶性脑缺血动物模型有许多种，建立一种具有良好重复性并能最大程度模拟人类缺血性卒中发生的动物模型一直是实验性脑血管病研究关注的重点。

2、1986年，日本学者Koizumi［3］发明了线栓法制备局灶性脑缺血大鼠模型，1995年，我国也出现了相关的报道［4］。此后国内外学者对它不断改进，对模型原理，栓线制备，动物选择和操作过程等各个环节和实验处理因素的认识都得到发展和改进。本研究就线栓法制备局灶性脑缺血大鼠模型中的一些关键问题和影响因素作一综述。1动物选择1.1鼠种和种系制作脑缺血模型选用的实验动物有：小鼠、大鼠、蒙古沙土鼠、猫、狗、猪、羊以及灵长类动物猕猴等，其中最为常用的是大鼠，使用率超过90%。选用大鼠作为脑缺血模型具有以下优点：种系内纯性好，同

3、系大鼠间遗传差异小，保证了试验对象的一致性；神经系统比较发达，与人类有类似的脑血管解剖特点；有极强的抗感染能力和生命力，常规操作一般不会引起伤口继发感染，能经受麻醉、外科手术及术后感染的考验，可对神经功能缺陷、药物疗效等长期观察提供可能；成本低，来源有保障；能够为动物保护者接受［2］。因此，大鼠已经成为目前最常用的局灶性脑缺血动物模型。在不同的大鼠品种之间，Fischer344大鼠的大脑中动脉(MCA)变异较小，MCAO后形成的脑梗死体积一致性好；而CAO模型制备的麻醉中，推荐2%戊巴比妥钠45mg/kg进行大鼠

4、腹腔麻醉并保温。至于挥发性麻醉剂乙醚的吸入应用，因为量大易引起麻醉过量，造成动物死亡，量小又会出现麻醉不足，动物过早苏醒，目前不作为线栓法制备MCAO模型的麻醉选择。但乙醚可作为补吸麻醉剂，进行需要时的追加麻醉。郑健等［13］先用乌拉坦﹙0.3g/kg，ip﹚浅麻醉大鼠，再以乙醚强化麻醉。其优点是动物苏醒较快，约需30min，有利于观察神经体征。另外，动物年龄与药物代谢量也有一定的关系，老龄动物对麻醉药的耐受性下降，而且不同性别的动物对麻醉药品的耐受性也存在差异，比如雌性动物对戊巴比妥钠的反映敏感性为雄性动物的2.

5、5～3.8倍［14］。因此，在麻醉过程中必须考虑动物的年龄、体重、性别、品系因素，使在模型的制作过程中尽量减少麻醉引起的对成功率及重复性等各方面的影响。3手术3.1手术部位国内外线栓法MCAO模型大多采用麻醉后颈部正中切口，此法逐步成为经典的手术入路。该手术入路要经过颌下腺、颈部淋巴结；需要暴露、分离胸骨舌骨肌、肩胛舌骨肌、胸骨乳突肌、锁骨乳突肌和二腹肌等肌肉；气管、迷走神经、交感神经和舌咽神经丛需要在手术中分离并保护，因而具有一定的手术难度和风险。陈春富等［15］则采用由颈部旁侧入路，发现此法易行肌肉分离，术中出

6、血少，手术视野暴露好，便于分离血管；同时，颈部旁侧入路对器官刺激性小，气道分泌物少，不用气管造瘘行机械呼吸，手术相对简单，手术标准化操作均在30min内完成，闭塞成功率为94.1%。3.2翼腭动脉﹙PPA﹚是否结扎在线栓法发展史中对PPA是否结扎有着不同的观点。曹霞等［16］认为PPA支从颈内动脉（ICA）向前外侧分出，而且PPA较粗，与ICA交角小，栓线容易进入PPA而无法进入颅内，造成造模失败。若永久性PPA结扎则可较非结扎组的模型成功率提高26%～40%。亦有学者认为无需闭塞PPA。王耀明等［17］认为PPA

7、位置深在，若结扎该动脉，神经肌肉损害严重，引起进食困难，给大鼠造成极大伤害，增加死亡率，故不提倡结扎PPA。Koizumi［3］认为由颈外动脉(ECA)残端进线时，用微动脉夹暂时夹闭PPA，进线成功后取下，保持PPA的开放。可以保持血管壁光滑，避免了结扎PPA引起涡流而形成血栓的可能，从而减少ICA内血栓形成的机会，栓线拔出后较快恢复灌注；并证明在梗死面积和神经功能缺损的体征方面均无明显差异。因此现在多主张暂时闭塞，这可兼顾脑缺血大鼠造模和再灌注研究，同时也明显降低手术难度，提高制备模型的成功率。4栓线的影响4.1

8、栓线的直径及头端处理栓线直径的选择要根据动物大小而定，动物间体重差异不宜太大。栓线直径需要和ICA系统的内径相适应才能阻断ICA中栓线周围的血流，最大限度地阻断进入MCA的血流。插线前需要对栓线前端进行加工处理，其目的是阻断经大脑前动脉和前交通动脉来的侧支血流。有选用3—0和4—0尼龙线，研究者研究发现使用3—0尼龙线蛛网膜下腔出血(SAH)率明显高于4—0