脂联素在肝纤维化发生机制中作用的研究

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1、j厣交通义訾博士学位论文脂联素在肝纤维化发生机制中作用的研究研究生：指导教师：学科专业：申请学位：培养单位：答辩日期：董志霞(0097209089)谢青教授内科学医学博士(科学学位)上海交通大学医学院附属瑞金医院2013年05月08日上海交通大学医学院博士研究生学位论文脂联素在肝纤维化发生机制中作用的研究STUDYOFTHEROLEOFADIPONECTININTHEPATHOGENESISOFHEPATICFIBROSIS培养单位：学科专业：研究生：指导教师：申请学位：关键词：研究方向：答辩日期：

2、上海交通大学医学院附属瑞金医院内科学董志霞谢青教授医学博士(科学学位)肝纤维化，肝星状细胞，脂联素，一氧化氮，一氧化氮合酶肝纤维化发生机制2013年05月08日上海交通大学医学院博士学位论文上海交通大学上海父逋大罕学位论文原创性声明本人郑重声明：所呈交的学位论文，是本人在导师的指导下，独立进行研究工作所取得的成果。除文中已经注明引用的内容外，本论文不包含任何其他个人或集体已经发表或撰写过的作品成果。对本文的研究做出重要贡献的个人和集体，均已在文中以明确方式标明。本人完全意识到本声明的法律结果由本人承

3、担。学位论文作者签名：蓬老嘏日期：加B年乡月7日上海交通大学学位论文版权使用授权书本学位论文作者完全了解学校有关保留、使用学位论文的规定，同意学校保留并向国家有关部门或机构送交论文的复印件和电子版，允许论文被查阅和借阅。本人授权上海交通大学可以将本学位论文的全部或部分内容编入有关数据库进行检索，可以采用影印、缩印或扫描等复制手段保存和汇编本学位论文。保密口，在年解密后适用本授权书。本学位论文属于不保密囱。(请在以上方框内打“√”)学位论文作者签名：蓬意霰日期：删弓年上月7日指导教师签名：彰两弯日期：

4、细J弓年／月孑／日上海交通大学医学院博士学位论文脂联素在肝纤维化发生机制中作用的研究摘要背景与目的肝纤维化是多种慢性肝病共同的病理改变，严重威胁人类的健康。脂联素，一个由脂肪细胞分泌的激素样细胞因子，具有肝保护和抗肝纤维化的作用，然而脂联素抗肝纤维化的作用机制尚未完全阐明。近年来研究显示脂联素可诱导内皮细胞中一氧化氮合成酶(eNOS)及一氧化氮(NO)产生，在疾病的发生、发展中发挥重要的作用。因此本课题旨在探讨脂联素是否促进肝非实质细胞(肝星状细胞HSCs、枯否细胞KCs、内皮细胞SECs)中NOS

5、的表达及NO产生，探讨脂联素介导的NOS及NO对HSCs的作用，了解脂联素诱导产生的NO在肝纤维化发生发展中的作用及其产生的分子机制。方法细胞实验建立体外肝纤维化模型，SD大鼠肝脏原位灌注分离HSCs、KCs和SECs，进行体外培养。①予以脂联素处理后，RT-PCR检测iNOS，eNOS，T】NOSmRNA在三种不同细胞中的表达，WesternBlot检测烈OS及eNOS蛋白表达；ELISA检测细胞培养上清液中N02．／N03．的浓度。②细胞处理后，通过RT-PCR检测CollagenI和a-SMA

6、mRNA的表达，观察脂联素对HSCs活化的影响；采用Brdu增殖实验检测HSCs的增殖；通过流式细胞检测方法观察脂联素对HSCs凋亡的影响；利用细胞划痕实验检测脂联素对HSCs迁移作用的影响。③运用Western-Blot检测脂联素信号通路中关键信号分子，筛选出脂联素诱导NO产生通过的关键信号分子，探讨HSCs诱导NO产生的分子机制。④动物实验建立肝纤维化模型，以四氯化碳(CCL4)500mg&g，一周两次腹腔注射建立小鼠(野生型小鼠C57BL／6和脂联素基因敲除小鼠)肝纤维化模型。肝纤维化造模过程

7、中同时予以NOS抑制剂L-NAME(500mg／L水)以及NO供体上海交通大学医学院博士学位论文Molsidomine(120mg／L水)饮水喂养治疗，探讨NO在肝纤维化中的作用。夸士甲：口木①脂联素显著上调了HSCs和KCs中uNOS基因f分别升高1000和8000倍，P

8、．)的浓度。②脂联素抑制了HSCs的增殖(75％，P<0．01)和迁移(40％，P<0．05)，促进了其凋亡(90％，P<0．05)。／NOSsiRNA预处理部分逆转了脂联素对HSCs的增殖、迁移及凋亡的作用(P<0．05)。③信号通路实验研究显示脂联素增加了AMPK、ERKl／2以及JNK的磷酸化，诱导了NF．KBIKBa及p-p65的磷酸化，并促进了NF．KBp-p65的核转位。④体内实验结果显示，与野生型小鼠相比，在CCIA诱导下，脂联素基因缺陷的小鼠形成更严重