胶质瘤耐药细胞与胶质瘤干细胞的关系

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1、分类号盘丝望UDc6l丕密级公珏江荨大擎硕士学位论文MASTER，SDISSERTATIoN胶质瘤耐药细胞与胶质瘤干细胞的关系Relationshipbetweenchemotherapy-resistantcellsandstemcellsingliomas答辩日期：分类号UDC欠铸l‘I占硕士学位论文密级趁编号险皇绶￡￡!』墨!锰胶质瘤耐药细胞于胶质瘤干细胞的关系Relationshipbetweenchemotherapy-resistantcellsandstemcellsingliomas作者姓名：囱定麴指导教师：王在担(圭廷匡垭≥●■■■■■■■●■■■■■■■■

2、■■■■■■■■■■■■●■■■●●■■■■●■■■■一II1I■■■■■●王玉海(主任医师)申请学位：亟±学科专业：处型堂论文答辩日期：至Q!兰生Q鱼且!皇旦学位授予单位：适菱太堂学位授予日期：一．2Q!兰生Q重且竺!目答辩委员会主席：碰蔓熬援基金资助：江苏省卫生厅面上科研项目资助(H2006040)独创性声明本人郑重声明：所呈交的学位论文，是本人在导师的指导下，独立进行研究工作所取得的成果。除文中已注明引用的内容以外，本论文不包含任何其他个人或集体已经发表或撰写过的作品成果。对本文的研究做出重要贡献的个人和集体，均已在文中以明确方式标明。本人完全意识到本声明的法律结果由本

3、人承担。学位论文作者签名：f矽金‘孔日期：2013年06月lp日学位论文版权授予书本学位论文作者同意学校保留该学位论文并向围家有关部门或机构送交论文的复印件和电子版，允许论文被查阅和借阅。本人授权江苏大学可以将本学位论文的全部内容或部分内容编入有关数据库进行检索，可以采用影印、缩印或扫描等复制手段保存和汇编本学位论文。保密口，在本学位论文属于不保密年解密后适用本授权书。口。学位论文作者签名：<茜)当弘签7--口期：2013年06月f0日导师签名：那让导师签名：易瓜剧．签字日期：2013年06月CD日江苏大学硕士学位论文中文摘要目的胶质瘤干细胞(gliomastemcells，

4、GSC)的发现为胶质瘤化疗耐药机理提供了新的假说，即耐药的主体细胞为肿瘤干细胞，是肿瘤复发的根本原因。而按照传统观念认为，化疗耐药细胞就是肿瘤复发的根源。肿瘤耐药细胞与肿瘤干细胞之间是否存在关系，究竟存在一种什么关系。探讨出其中的关系，选择胶质瘤细胞中重要的细胞亚群，作为胶质瘤根治的靶细胞具有重要指导意义，为胶质瘤的治疗找到更好的方法。方法．本研究分三部分。第一部分：胶质瘤耐药细胞的培养及生物学鉴定。采用大剂量冲击法诱导构建人脑胶质瘤U25l耐替莫唑胺(TMZ)细胞株(命名为U25l／TMZ)；采用MTT法检测亲代细胞(U251)和U25lfrMZ对TMZ的敏感性；绘制细胞增

5、殖倍增曲线，比较两种细胞生长情况：采用免疫荧光技术检测两者CDl33的表达情况；Westernblotting检测两种细胞ABCG2的表达情况。第二部分：进一步分析U251／TMZ与胶质瘤干细胞的关系，U251／TMZ体外胶质瘤干细胞条件下培养；采用免疫荧光技术检测获得干细胞球CDl33表达情况：以及免疫荧光技术检测U251／TMZ与U25l细胞CDl33、Nestin、ABCG2的表达情况；Westernblotting检测两者CDl33、Nestin、ABCG2的表达情况。第三部分：为进一步探讨胶质瘤耐药的机理，分析了26例人体胶质瘤标本中具有肿瘤干细胞特性细胞的分布特征

6、。采用江苏大学硕士学位论文免疫组织化学方法检测26例胶质瘤标本中CDl33、Nestin、ABCG2阳性细胞及壁龛的表达情况。计算CDl33、Nestin、ABCG2阳性细胞及壁龛数，给予分级，并分析其与病理分级的相关性。结果第一部分：成功构建胶质瘤耐替莫唑胺细胞株，其耐药指数为亲代的8．1倍(卢一63．28，P=-0．OO)；U251／TMZ增殖倍增较亲代细胞延长；U25l厂rMZ细胞表达CDl33较亲代细胞明显增加(t--45．35，P=-0．00)，U25l厂rMZ细胞ABCG2表达较亲代细胞明显增高(卢6．19，P=0．00)。第二部分：U251／TMZ体外胶质瘤干细

7、胞条件下培养成功获得胶质瘤干细胞球；所获得胶质瘤干细胞球在含有血清的环境中存在分化现象；免疫荧光技术检测干细胞球CDl33表达呈阳性；免疫荧光技术检测U25I／TMZ细胞干细胞标记物表达分别为CDl33(65．3±4．16)％、Nestin(62．2±12．2)％、ABCG2(70．8±10．8)％；U251细胞表达分别为CDl33(3．9±O．99)％、Nestin(12．8±3．42)％、ABCG2(24．7-4-6．1)％；U251／TMZ表达较U251明显增加，分别为CDl33(t--45．35