索拉非尼联合放射抗肝细胞癌效应的实验研究

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1、万方数据索拉非尼联合放射抗肝细胞癌效应的实验研究院系专业姓名指导教师导师组成员肿瘤医院肿瘤学余雯蒋国梁教授邵春林教授赵建东副主任医师万方数据索拉非尼联合放射抗肝细胞癌效应的实验研究复旦大学博士学位论文目录中文摘要⋯一⋯⋯⋯⋯⋯⋯一一⋯⋯⋯一一⋯一英文摘要⋯⋯⋯⋯一一⋯⋯⋯⋯第一部分：索拉非尼联合放射抗肝细胞癌的体外研究研究背景材料和方法结果讨论小结参考文献一第二部分：索拉非尼对肝癌细胞放射增敏效应的机制研究研究背景⋯一⋯⋯一一⋯一一⋯．．14一．20材料和方法⋯⋯⋯⋯一⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯一⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯一26结果⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯

2、⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯一⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯36讨{仑⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯一⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯一⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯42小结⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯44参考文献⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯一⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯一⋯45第三部分：索拉非尼联合放射抗肝癌效应的体内研究研究背景一材料和方法⋯⋯⋯一⋯⋯⋯⋯一⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯一⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯一⋯48万方数据索拉非尼联合放射抗肝细胞癌效应的实验研究复旦大学博士学位论文结果讨论小结参考文献结论短语索引附录1：综述⋯⋯⋯⋯⋯⋯．附录2：博士期间发表论文致谢⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯一50596

3、1626364667475万方数据索拉非尼联合放射抗肝细胞癌效应的实验研究复旦大学博士学位论文中文摘要第一部分索拉非尼联合放射抗肝细胞癌的体外研究目的：索拉非尼的多激酶抑制作用提示其与放射联合有协同增效的潜在可能。本部分研究旨在通过两种人肝癌细胞株(SMMC一7721，SK—HEP一1)来观察索拉非尼与放射联合是否对肝癌有协同抗肿瘤效应以及可能产生协同效应的联合方式。方法：通过CCK．8法细胞毒性增殖实验绘制不同浓度索拉非尼处理48h后的肝癌细胞存活曲线，计算索拉非尼对肝癌细胞的抑制浓度(IC)。选择IC50(抑制细胞生长50％时的药物浓度)的

4、10％作为克隆形成实验的药物浓度。通过克隆形成实验比较索拉非尼在v线照射前／后处理与单纯放射后的肝癌细胞剂量效应曲线，计算放射增敏比。结果：SMMC一7721和SK．HEP一1细胞的IC50分别是4．82uM和9．55¨M。故选用10％的IC50，即0．5uM和1uM分别作为两种肝癌细胞克隆形成实验的药物浓度。索拉非尼对两种肝癌细胞株的放射敏感性改变因索拉非尼与放射联合方式的不同而异。索拉非尼后处理(R->S)明显增加了SMMC一772i细胞的放射敏感性(SER=1．21)，但几乎不改变SK—HEP一1细胞的存活曲线斜率(SER=I．00)。索

5、拉非尼预处理(S+R)则使两种肝癌细胞的存活曲线在较高照射剂量区域的斜率都出现明显增加(B值增加)，SMMC一7721和SK—HEP一2的SER分别是1．10和1．18。结论：体外实验发现了索拉非尼与放射联合对两种不同放射敏感性的肝癌细胞产生不同程度的放射增敏效应。关键词：索拉非尼，放射，放射增敏剂，肝细胞肝癌，体外中图分类号：R730．55万方数据索拉非尼联合放射抗肝细胞癌效应的实验研究复旦大学博士学位论文第二部分索拉非尼对肝癌细胞放射增敏效应的机制研究目的：本部分研究旨在从细胞增殖、DNA损伤及修复、细胞凋亡等多个可能影响放射敏感性的方面，

6、来阐述索拉非尼与放射联合在肝癌细胞中产生协同效应的潜在机制。方法：通过Westernblot方法检测索拉非尼联合放射作用于肝癌细胞对放射所诱导的细胞增殖(p—ERKI／2)、DNA损伤修复(p—Ku70、P—BRCAl)、细胞凋亡(p—NF—KB)和新生血管形成(p-VEGFR2)等多个方面的蛋白表达水平的调控。通过微核实验考察索拉非尼是否增加了放射所诱导的DNA损伤。通过AnnexinV／PI流式细胞术和caspase．3酶活性检测，观察索拉非尼对放射所诱导细胞凋亡的影响。结果：索拉非尼与放射联合作用于肝癌细胞可以有效地抑制由放射诱导的VEG

7、FR2磷酸化及其下游信号传导通路中ERK的激活。索拉非尼与放射联合较单纯放射在肝癌细胞中增加了细胞微核率、同时又抑制双链断裂HR和NHEJ修复途径的关键蛋白BRCAl和Ku70的磷酸化表达。此外，放射所诱发的NF—KB磷酸化激活可以被索拉非尼的联合应用所抑制，索拉非尼也显著增加了放射后早期凋亡细胞比例和caspase一3酶活性。然而，SK．HEP．1细胞索拉非尼在放射后给药组在以上作用机制中均有所例外，这也正解释了这一组没有产生放射增敏的结果。结论：索拉非尼与放射联用于肝癌细胞，可以抑制放射后细胞增殖，增加放射引起的DNA损伤并抑制两种关键途径

8、的DNA修复能力，同时促进放射诱导的凋亡。以上多种机制共同促成了索拉非尼对肝癌细胞的放射增敏作用。关键词：索拉非尼，放射增敏剂，肝细胞肝癌，细胞增殖，