电针刺激联合bmscs移植治疗对脑出血大鼠脑组织内 aqp-4、aqp-9及mmp-9蛋白表达的影响

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1、中图分类号：R89；R36；R39硕士学位论文电针刺激联合BMSCs移植治疗对脑出血大鼠脑组织内AQP-4、AQP-9及MMP-9蛋白表达的影响院（系）、所基础医学院研究生姓名范光碧学科、专业人体解剖与组织胚胎学导师姓名余崇林教授二Ο一三年四月1目录1电针刺激联合BMSCs移植治疗对脑出血大鼠脑组织内AQP-4、AQP-9及MMP-9蛋白表达的影响……………………………………11.1中文摘要………………………………………………………………11.2英文摘要………………………………………………………………41.3前言……………………

2、………………………………………………81.4材料与方法……………………………………………………………101.5结果……………………………………………………………………301.6讨论……………………………………………………………………421.7结论……………………………………………………………………541.8参考文献………………………………………………………………551.9英汉缩略词对照表……………………………………………………612致谢……………………………………………………………………633基质金属蛋白酶参与脑出血后脑水肿的研

3、究进展（综述）…………………………………………………………………………642电针刺激联合BMSCs移植治疗对脑出血大鼠脑组织内AQP-4、AQP-9及MMP-9蛋白表达的影响摘要目的：电针刺激联合骨髓间充质干细胞(bonemarrowmesenchymalstemcells,BMSCs)移植治疗脑出血(IntracerebralHemorrhage,ICH)大鼠，观察出血灶周边脑区脑水肿相关蛋白水通道蛋白4（aquaporins-4，AQP-4）、水通道蛋白9（aquaporins-9，AQP-9）、基质金属蛋白酶9（matri

4、xmetalloproteinase-9，MMP-9）的表达变化，探讨通过联合治疗能否促进脑出血大鼠出血灶周边脑区水转运，减轻脑水肿，改善神经缺失症状。方法：1.建立脑出血大鼠模型：利用脑立体定位仪向SD大鼠右侧尾状核区注射肝素+Ⅰ型胶原酶诱导脑出血模型，于术后2h、24h、48h进行三次神经损害程度评分（Neurologicalseverityscore，NSS评分），任意一次评分大于9分者入选实验组。2.培养骨髓间充质干细胞（BMSCs）：将冷冻保存并已作GFP标记的BMSCs进行复苏、传代，当生长至细胞融合度为80%左右时

5、，换预诱导液诱导24h，于移植前6h改用无血清诱导液诱导，移植时收7集细胞，调整细胞浓度至2.5×10个/ml用于移植。3.实验动物分组：生理盐水组(Control组)，造模后第3d沿相同手术入路向右侧尾状核区注入生理盐水20μl；细胞移植组(BMSCs组)，造模后第3d往出血灶内移植BMSCs20μl；电针治疗组（electro-acupuncturetherapy，Ea组），造模后第3d开始以连续波、频率3Hz、强度1V的电针刺激大鼠百会穴和大椎穴，每天1次直至处死动物；电针刺激联合细胞移植组（electro-acupunc

6、turecombinedwithBMSCstransplantation,Ea-BMSCs组），造模后第3天往出血灶移植3BMSCs20μl，细胞移植后2h开始电针刺激，之后同电针治疗组处理方法一致。4.按分组后喂养的时间不同将各组动物再分为1d、3d、5d、7d及14d5个亚组，在相应时间点采血，收集血清，处死动物取出脑组织。5.采用免疫组化SABC法观察AQP-4、AQP-9及MMP-9在脑组织中的分布；Western-blotting检测AQP-4在出血灶周边脑区的表达变化；干湿法检测出血灶周边脑组织水含量；放射免疫法（R

7、IA）测定血清中白细胞介素2（Interleukin-2，IL-2）的含量。结果：1.出血灶周边脑组织水含量：①各组模型脑组织水含量在第3d开始升高，第5d达到峰值。②Ea组各时间点脑组织水含量均低于其余各组（p＜0.05）。③Ea-BMSCs组只有5d、7d组脑组织水含量低于Control组（p＜0.05）。④Ea-BMSCs组与BMSCs组之间比较未见统计差异。2.出血灶周边区脑组织AQP-4的表达变化：（1）免疫荧光双标显示，AQP-4阳性物质表达于出血灶周边脑区胶质酸性纤维蛋白（GFAP）阳性细胞上。（2）免疫组化检测出

8、血灶周边脑区AQP-4阳性产物的OD值（平均光密度值）：①Control组、BMSCs组和EaBMSCs组AQP-4蛋白在第3d开始升高，于第5d达到峰值，BMSCs组和Ea-BMSCs组在第7d后再度升高，而Control组和Ea组在达峰值后未见升高。②Ea-