环境嗜肺军团菌在巨噬细胞内的生长特征及致病机制研究

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1、万方数据复旦态堂丝±堂焦论塞学校代码：10246学号：10111280001环境嗜肺军团菌在巨噬细胞内的生长特征及致病机制研究CharacteristicsofIntracellularGrowthandPathogenesisofEnvironmentalLegionellaPneumophilainMacrophages院系：华东医院专业：姓名：导师：指导组成员：内科学陶黎黎瞿介明教授罗招庆副教授姜红妮副主任医师——————————j哩拦监螳笪L万方数据IIllllIlltllIIIIIlUllIIIllMIIIllIllllIllllUIY2700487目

2、录中文摘要⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯1英文摘要⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯。3英文缩略语⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯．．7第一部分环境嗜肺军团菌在小鼠巨噬细胞内的生长特征⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯81j订言⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯．⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯．88日盯雷⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯．⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯．材料和方法⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯9结果⋯⋯⋯⋯⋯⋯

3、⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯27讨论⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯．．⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯．第二部分环境军团菌感染导致小鼠巨噬细胞焦亡及其机制⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯．41前言⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯41日盯舌⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯．．⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯．．⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯．．4l材料和方法⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯．．42结果⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯52讨论⋯⋯⋯⋯

4、⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯t；t；全文总结⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯．71参考文献⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯72综述⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯．84参考文献⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯．．．⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯．．92附录发表论文⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯．101致谢⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯

5、⋯．．103万方数据复旦太堂熊±堂焦途塞中文摘要第一部分环境嗜肺军团菌在小鼠巨噬细胞内的生长特征【目的】嗜肺军团菌是一种胞内生长菌，可引起爆发性、致死性肺炎，水体环境中定植的嗜肺军团菌是人军团菌病的主要感染源。本研究采用医院供水系统中分离的菌株，研究环境嗜肺军团菌(EnvironmentalLegionellapneumophila，LPE)在宿主巨噬细胞内的生长特征及机制。【方法】以临床分离的嗜肺军团菌费城株的衍生菌株JR32作为对照菌株，通过细菌定量培养观察LPE在A／J小鼠骨髓巨噬细胞(BonemallowderivedmacrophagefromA／Jm

6、ouse，BMDMA／j)，人巨噬细胞U937和阿米巴宿主盘基网柄菌胞内的生长情况。随后通过对LPE509中Dot／IcmIVB型分泌系统(TypeIVBSecretionSystem，T4BSS)的组成和D．内酰胺酶转位实验检测LPE509运输效应蛋白至宿主胞浆的功能。最后通过对宿主蛋白Rabl，LAMP．1和细菌囊泡的荧光染色研究感染早期宿主蛋白对LPE509囊泡的锚定及其在胞内的发展。【结果】(1)LPE509在人巨噬细胞U937和盘基网柄菌内可有效生长，但在BMDM～j内的生长受限。敲除如厶4基因可限制LPE509在U937细胞中的生长，但不影响其在BM

7、DMA／j中的生长。(2)基因测序显示结果LPE509具有由27个基因组成的完整的T4BSS；D．内酰胺酶转位实验显示LPE509对效应蛋白的转运功能与JR32相似(1pgl171：76．3+3．9％VS70．54-7．8，P>0．05；lp90796：56．9士4．9％VS604-6．O％，P>0．05)。(3)荧光染色显示LPE509感染小鼠巨噬细胞后lh，2h和6h对宿主蛋白LAMP一1和Rabl的招募作用与JR32相比无明显差别(P>0．05)。(4)LPE509感染BMDMA／j后14h，发展为大型囊泡的比率显著小于JR32(18．24-2．0％VS6

8、6．o士5．2％，P<0