嗜肺军团菌巨噬细胞感染增强蛋白的表达和纯化及其在血清学诊断中的应用

《嗜肺军团菌巨噬细胞感染增强蛋白的表达和纯化及其在血清学诊断中的应用》由会员上传分享，免费在线阅读，更多相关内容在学术论文-天天文库。

1、分类号：R3单位代码：10752密级：公开学号：2010011宁夏医科大学硕士研究生学位论文嗜肺军团菌巨噬细胞感染增强蛋白的表达和纯化及其在血清学诊断中的应用LegionellapneumophilaMIPproteinexpressionandpurificationanditsapplicationinserologicaldiagnosis学位申请人：刘黎指导教师：杨志伟申请学位门类级别：医学专业名称：病原生物学研究方向：感染免疫所在学院：基础医学院论文完成日期：二○一三年四月宁夏医科大学研究生学院NingxiaMedicalUniversityT

2、hesisforApplicationofMaster’sDegreeLegionellapneumophilaMIPproteinexpressionandpurificationanditsapplicationinserologicaldiagnosisStudent’sName:liuliSupervisor：yangzhiweiSubjectCategory:MedicalscienceMajor:PathogenicBiologySpecialty:InfectionImmunitySchool:SchoolofBsaicMedicalSci

3、encesCompletionDate:Apr,2013宁夏医科大学学位论文独创性声明本人郑重声明：所呈交的学位论文，是个人在导师的指导下，独立进行研究工作所取得的成果，无抄袭及编造行为。除文中已经特别加以注明引用的内容外，本论文不含任何其他个人或集体已经发表或撰写过的作品成果。对本文的研究做出重要贡献的个人和集体，均已在文中以明确方式标明并致谢。本人完全意识到本声明的法律结果由本人承担。论文作者签名＿＿＿＿＿论文导师签名＿＿＿＿＿年月日年月日宁夏医科大学关于学位论文使用授权的声明宁夏医科大学有权保留使用本人学位论文，同意学校按规定向国家有关部门机构送交

4、论文的复印件和电子版，允许被查阅和借阅。本人授权宁夏医科大学可以将本学位论文的全部或部分内容编入有关数据库进行检索，可以采用影印、缩印或其他复印手段保存和汇编本学位论文。可以公布（包括刊登）论文的全部或部分内容。（保密论文在解密后应遵守此规定）论文作者签名＿＿＿＿＿论文导师签名＿＿＿＿＿年月日年月日宁夏医科大学硕士研究生学位论文中文摘要嗜肺军团菌巨噬细胞感染增强蛋白的表达和纯化及其在血清学诊断中的应用摘要目的表达和纯化出嗜肺军团菌巨噬细胞感染增强蛋白（macrophageinfectivitypotentiator，MIP），研究其在军团菌肺炎血清学诊断

5、中应用价值。方法将已构建成功的重组质粒pET-mip转化E.coliBL21感受态细胞中,诱导MIP蛋白表达，运用SDS-PAGE电泳分析和亲和层析法纯化。用纯化的MIP蛋白作为包被抗原建立间接ELISA法，同时DRG的军团菌IgG/IgM/IgA试剂盒和R&D的ELISAIgG、IgM、IgA试剂盒分别检测血清中的嗜肺军团菌特异性IgG、IgM、IgA抗体，然后对这两种方法进行比较，通过敏感性、特异性以及不同检测结果的一致性，来评价该方法的应用价值。结果诱导相对分子质量（Mr）大约40000的MIP融合蛋白在E.coliBL21中表达并纯化。用以纯化蛋

6、白作为包被抗原建立的间接ELISA检测方法分别检测血清中嗜肺军团菌特异性IgG、IgM、IgA抗体。与DRGIgG/M/A试剂盒比较：灵敏度90.9%，特异度92.8%，一致性Kappa值0.837（P<0.05），ROC曲线下面积0.911。与ELISA试剂盒（R&D）进行比较：IgG抗体的灵敏度88.5%，特异度95.5%，一致性Kappa值0.846（P<0.05），ROC曲线下面积0.927。IgM抗体的灵敏度89.3%，特异度97.6%，一致性Kappa值0.88（P<0.05），ROC曲线下面积0.947。IgA抗体的灵敏度90%，特异度95

7、%，一致性Kappa值0.854（P<0.05），ROC曲线下面积0.929。结论成功诱导了嗜肺军团菌MIP蛋白稳定表达并纯化，运用MIP蛋白作为包被抗原的军团菌肺炎的血清学诊断方法具有较高的诊断价值。[关键词]嗜肺军团菌；巨噬细胞感染增强蛋白；蛋白表达；血清学诊断；I宁夏医科大学硕士研究生学位论文中文摘要[中图分类号]R392-33，R517.9[文献标志码]AII宁夏医科大学硕士研究生学位论文英文摘要LegionellapneumophilaMIPproteinexpressionandpurificationanditsapplicationins

8、erologicaldiagnosisAbstractObjective：Toe