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1、2898ChinJNosocomiolVol.20No.182010综述嗜肺军团菌的检测方法及临床应用评价杨军霞,刘贵建(中国中医科学院广安门医院检验科,北京100053)关键词:嗜肺军团菌;实验室检测;应用评价中图分类号:R378文献标识码:A文章编号:10054529(2010)18289803军团菌属是一种常见的需氧革兰阴性杆菌,广泛存在于无病因意义的病原体时,当怀疑可能为军团菌感染。作姬美自然界中,能引起以发热和呼吸道症状为主的疾病,该病首尼兹(Gimenez)染色,如炎症细胞中染出红色杆菌,便可基本发于1976年的美国一次军人聚会,故称作军团菌
2、病,次年分认定为该菌,但本法存在诸多缺点,如特异性不稳定,且需肺离出一种新的病原体,1978年,此病原体被命名为嗜肺军团活检,对组织损伤大。另外,某些军团菌也呈抗酸染色阳性。菌(Legionellapneumophila,LP)。近年来,随着人们生活水除了上述方法外,还可作镀银染色等检查。平的提高,军团菌的发病率有上升的趋势,特别是医院感染2.2分离培养军团菌分离培养法的特异性为100.0%,是的增加,引起了人们的高度重视。由于军团菌病缺乏典型的检测嗜肺军团菌的金标准[3]。患者唾液、痰、胸水、血液、气临床表现,与其他病原体引起的肺炎很难鉴别,因此采用特管抽吸物、尸检或活检组织
3、,以及环境因素如水、土壤等均可异、敏感、快速的检测方法就显得非常重要。笔者就近年来用于分离该细菌。目前公认的最适宜培养基是缓冲活性炭对嗜肺军团菌的实验室检测方法及临床应用评价综述如下。酵母浸液,加上铁、L半胱氨酸和酮戊二酸,称之为BCYEa培养基,在该培养基上加入0.01%溴甲酚紫和0.001%溴酚1病原学蓝,可以鉴定军团菌科细菌,在这种培养基上生长的嗜肺军军团菌属是革兰阴性杆菌,不形成芽胞,无荚膜,有端鞭团菌菌落平坦,呈浅绿色。细菌培养作为检测军团菌的金标毛或侧鞭毛;不易被通常的革兰染料染色,可用改良的准,存在很多优点,如:(1)对于疾病的诊断具有良好的敏感Diete
4、rle饱和银染色法或直接免疫荧光法检出;菌体长2~性和特异性,敏感性为50.0%~80.0%,特异性为50m,宽0.5~1m,呈多形性,菌体因培养条件不同而有100.0%[4],可以作为临床确诊和鉴定的标准。(2)对免疫抑变化;军团菌属是单核细胞和巨噬细胞的兼性细胞内寄生制患者无法进行抗体检测时,可用培养法进行检测。(3)对菌。军团菌属目前已发现有49个种,70多个血清型,21种于由非嗜肺军团菌血清型引起的军团菌性肺炎还需采用有致病性,90%军团菌爆发是由嗜肺军团菌引起[1]。约有培养法进行确诊。但也存在一些缺点:(1)BCYEa培养基价80%的军团菌性肺炎是由LP引起的,嗜肺
5、军团菌有15个血格昂贵,来源困难,难以在临床普及,有报道称在上海疾病预清型(LP1~LP15),其中血清型是最常见的临床和环境防控制中心生产的SWFL和SWFG干燥培养基上[5],军团[2]分离株。菌的生长菌落和生长速度都与BCYEa培养基一致,价格只军团菌属的生存能力很强,在蒸馏水中可存活>100d,是它的10.0%,但敏感性较低。(2)该菌生长速度缓慢,至少在下水道污水中可存活1年。对热和常用化学消毒剂敏感,要3~7d才生长出来,还很容易被其他杂菌覆盖。(3)对实1%煤酚皂溶液处理数分钟即可杀死。本菌为需氧菌,但需验人员技术要求比较高,耗时费力。因此细菌培养法不利于要2.5
6、%~5.0%CO2环境;最适温度为35~36!,最适pH实验室的快速诊断。值为6.7~7.0,在25!和40!也可生长,但生长缓慢,营养2.3直接免疫荧光染色测定取呼吸道分泌物标本,用荧要求苛刻,初次分离必须采用L半胱氨酸和铁离子,在缓冲光素标记的抗军团菌抗体直接与标本作用后观察细菌形态。活性炭酵母浸液琼脂培养基(bufferedcharcoalyeastextract本法的灵敏度较低(25.0%~70.0%),技术要求高,需有经agar,BCYEa)上3~5d可形成1~2mm直径的光泽菌落,验的实验室技术人员在实验室内完成。优点是简便、快速,在FG(FeeleyGa
7、rman)琼脂培养基上,3~5d可见针尖大小<2h可出结果,且特异性较好(>95.0%)。的菌落,在紫外线照射下可产生荧光。2.4血清抗体检测作为检测军团菌感染的临床常用手段,检测患者血清中抗军团菌IgM及IgG抗体可以做出特异2实验室检测方法性诊断。IgM抗体出现早,感染机体约1周,可检测出血清2.1染色法气道分泌物涂片革兰染色,发现炎症细胞而中特异性抗体IgM。IgG抗体出现晚,可在体内持续数月,感染机体约2周可检测出IgG,可供流行病学的调查。确诊收稿
