我国部分地区hiv耐药变异和结构基因特征的研究

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1、中国医科大学研究生学位论文独创性声明本人申明所呈交的学位论文是我本人在导师指导下进行的研究工作及取得的研究成果。据我所知，除了文中特别加以标注和致谢的地方外，论文中不包含其他人已经发表或撰写过的研究成果，也不包含为获得我校或其他教育机构的学位或证书而使用过的材料，与我一同工作的同志对本研究所做的任何贡献均已在论文中作了明确的说明并表示谢意。申请学位论文与资料若有不实之处，本人承担一切相关责任。论文作者签名：誓毽虹日期：上竺丝中国医科大学研究生学位论文版权使用授权书本人完全了解中国医科大学有关保护知识产权的规定，即：研究生在攻读学位

2、期间论文工作的知识产权单位属中国医科大学。本人保证毕业离校后，发表论文或使用论文工作成果时署名单位为中国医科大学，且导师为通讯作者，通讯作者单位亦署名为中国医科大学。学校有权保留并向国家有关部门或机构送交论文的复印件和磁盘，允许论文被查阅和借阅。学校可以公布学位论文的全部或部分内容(保密内容除外)，以采用影印、缩印或其他手段保存论文。论文作者签名：指导教师签名：，、{中文论著摘要；、k⋯⋯．．，我国部分地区HIV耐药变异和结构基因特征的研究前言艾滋病是目前全世界成人死亡最主要的原因之一。然而其防治研究始终未取得根本性突破，主要原因

3、之一就在于HIV基因具有高度变异性。HIV的高度变异性对于HIV一1感染的流行病学、诊断、致病机制、疫苗研制及抗病毒治疗等诸多方面产生重要影响。人们为了明确病毒基因多态性对上述诸方面的影响．围绕HIV一1基因序列已经做了大量研究，内容几乎涉及到HIV所有的结构基因和调节基因。以上研究多是针对欧美国家和B亚型毒株，对其他亚型毒株的研究资料很少；我国这方面的观察研究资料极少。由于我国HIV一1A—G亚型和HIV一2共存，并在传播过程中不断发生突变与重组，使我国流行的HIV有着不同于其他任何国家的特点，无法照搬国外的研究结果，因此，我们

4、急需掌握我国HIV基因变异的基本情况．为进一步的艾滋病防治及疫苗研究打下基础。抗逆转录病毒药物会使H1V发生耐药性变异。目前美国等发达国家，21％一40％的艾滋病毒原发感染者对至少一种抗艾滋病药物出现明显耐药性。我国抗艾滋病毒药物已逐步实现国产化，越来越多的病人正在或即将接受HAART治疗。可以预测我国在临床大规模用药开始后也会不可避免面临同样的问题。由于不同亚型毒株耐药变异特点不同，而我HIV一1A—G亚型及HIV一2毒株共存的情况，这可能预示我国耐药变异较国外复杂。因此我们必须尽早获得H1V耐药资料，监测人群中耐药毒株的出现，

5、指导临床医生合理选择抗逆转录病毒药物，防止耐药毒株的流行，对我国的艾滋病防治工作具有重要的意义。1．研究对象方法由辽宁省疾病预防与控制中心、吉林省疾病预防与控制中心、河南省疾病预防与控制中心以及中国医科大学艾滋病研究所艾滋病确认实验室经WB试验确认为阳性的HIV／AIDS患者。辽宁省、吉林省分别于2002年6月和2003年9月开始对HIV／AIDS患者进行HAART治疗，入选标准为：CD4T淋巴细胞<350个／ram3。我们于用药前和用药6个月后分别采集血样，进行了病毒载量、CD4绝对计数测定和耐药株基因变异的研究。河南省尉氏县第

6、一次横断面实验室评估包括17名治疗病人(采样时已接受治疗3．6±1．7月)和12名当时未治疗病人，前者列为经治组，后者列为初治组。在第一次调查的3个月后进行了随访和第二次实验室评估，此间12名未治疗病人已开始接受抗病毒治疗。辽宁省11例艾滋病病人接受EFV+IDV(非核苷类逆转录酶抑制剂NNRTI+蛋白酶抑制剂PI)联合治疗6个月；吉林省24例艾滋病病人接受d4T+ddI+EFV(2×核苷类逆转录酶抑制剂NRTI+非核苷类逆转录酶抑制剂NNRTI)联合治疗6个月，河南省尉氏县29名艾滋病病人接受d4T+ddI+NVP(2×核苷类逆

7、转录酶抑制剂NRTI+非核苷类逆转录酶抑制剂NNRTI)方案治疗。按照知情同意的原则，以统一的问卷逐～进行咨询访谈，在采集流行病学资料的同时对病人进行临床体检并以EDTA一3K抗凝管采集外周静脉血。2．CD4+T淋巴细胞测定：20肛1CD4／CD8／CD3TriTEST试剂加入TruCOUNT管中．加入50／A抗凝血，室温避光15min，加入免洗溶血素450ffl，室温避光15min，用FACSMULTISET软件检测并进行自动分析、计算CD4+、CD8+、CD3+T淋巴细胞绝对值及相应比值等。3．病毒载量测定：以200．1血浆采

8、用标准版模板制备法提取RNA，采用Roche公司HIV一1Monitor1．5commercialkit在COBASAMPLI—COR自动载量仪上以RT—PCR方法测定病毒载量。检测范围为400—750，000copies／ml。4．病毒核酸提取：