中华仙影海葵多糖的分离及抗炎活性

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1、上海海洋大学硕士学位论文学校代码：10264研究生学号：M150208383上海海洋大学硕士学位论文题目：中华仙影海葵多糖的分离及抗炎活性Isolationandanti-inflammatoryactivitiesof英文题目：polysaccharidefromCereussinensis专业：食品科学与工程研究方向：功能性食品研究姓名：邬军文指导教师：刘克海二O一八年五月二十日上海海洋大学硕士学位论文上海海洋大学硕士学位论文答辩委员会成员名单姓名工作单位职称备注焦炳华第二军医大学教授杨炎上海

2、市农科院教授陈舜胜上海海洋大学教授马明上海海洋大学教授包斌上海海洋大学教授答辩地点上海海洋大学图书馆406答辩日期2018.05.20上海海洋大学硕士学位论文上海海洋大学学位论文原创性声明本人郑重声明：我恪守学术道德，崇尚严谨学风。所呈交的学位论文，是本人在导师的指导下，独立进行研究工作所取得的成果。除文中已经明确注明和引用的内容外，本论文不包含任何其他个人或集体已经发表或撰写过的作品及成果的内容。论文为本人亲自撰写，我对所写的内容负责，并完全意识到本声明的法律结果由本人承担。学位论文作者签名：日

3、期：年月日上海海洋大学学位论文版权使用授权书学位论文作者完全了解学校有关保留、使用学位论文的规定，同意学校保留并向国家有关部门或机构送交论文的复印件和电子版，允许论文被查阅或借阅。本人授权上海水产大学可以将本学位论文的全部或部分内容编入有关数据库进行检索，可以采用影印、缩印或扫描等复制手段保存和汇编本学位论文。保密√，在2年解密后适用本版权书。本学位论文属于不保密□学位论文作者签名：指导教师签名：日期：年月日日期：年月日上海海洋大学硕士论文中华仙影海葵多糖的分离及抗炎活性摘要据报道海葵具有滋阴壮阳

4、、收敛止泻等良好的药用活性和较高的医用价值，也可以用于治疗痔疮、脱肛、饶虫病和体癣等各种疾病，近年来其逐渐成为餐桌上的菜肴。随着海洋资源的不断开发与应用，海葵渐渐成为海洋天然产物研究热点之一，对海葵的研究主要集中在其蛋白质，多肽和毒素的结构及生物活性方面。由于海洋动物多糖因与人体细胞能够很好兼容，毒副作用不大，具有免疫、抗肿瘤、病毒等生理功能，已成为研究热点。作为一种海洋动物的中华仙影海葵，目前，对其研究报道较少。本课题旨在完善中华仙影海葵研究，也为研究中华仙影海葵多糖其他生物活性提供理论依据，首

5、先概述了海洋动物多糖研究进展，包括多糖提取、分离纯化、纯度鉴定、分子量测定、结构分析及其生物活性；采用水提醇沉法提取海葵多糖，DEAE-52纤维素离子交换柱和SephadexG-100凝胶柱分离纯化多糖，表征该多糖部分结构；建立体外细胞模型，研究该多糖抗炎活性。一、中华仙影海葵多糖提取分离纯化及结构部分表征新鲜中华仙影海葵丙酮脱脂后经干燥得到脱脂海葵粉，采用“水提醇沉法”提取海葵多糖，粗多糖经三氯乙酸法脱蛋白，脱蛋白多糖紫外全波段扫描后，发现在200nm处有较强吸收峰显示其为多糖物质，而在260n

6、m和280nm处无核酸和蛋白特征吸收峰，说明已经除去蛋白及核酸，之后将溶液浓缩、透析(MWCO3500Da)及冷冻干燥，得脱蛋白海葵多糖。随后，海葵多糖进行分离纯化，采用DEAE-52阴离子交换纤维素柱，选择NaCl溶液洗脱，浓度依次为0，0.1，0.3mol/L，多糖含量测定的使用苯酚-硫酸法，绘制多糖洗脱曲线，纵坐标为吸光值，根据其洗脱曲线，得到一种组分，命名CSP，经浓缩、透析、冷冻干燥后，再经过SephadexG-100葡聚糖凝胶柱进一步纯化，0.1mol/L的NaCl溶液作为洗脱剂，苯酚

7、-硫酸法测定多糖含量，绘制多糖洗脱曲线，收集组分，浓缩、透析及冷冻干燥得到海葵纯多糖CSP-1。最后，对多糖CSP-1进行结构表征，多糖CSP-1平均相对分子量(Mw)和多糖的单糖组成分别通过凝胶渗透色谱(GPC)测定和气相色谱质谱联用仪(GC-MS)分析。结果显示，多糖CSP-1主要由L-(-)-岩藻糖(Fucose)、D-(+)-甘露糖(Mannose)、D-葡萄糖(Glucose)组成，其Mw为56335Da。多糖CSP-1高碘酸氧化I上海海洋大学硕士论文反应得到，CSP-1分子中12.7%

8、是1→、1→6键型连接的糖基，1→2、1→2,6、1→4、1→4,6键型键合的糖基含量为70.9%，1→3、1→3,6、1→2,3、1→2,4、1→3,4、1→2,3,4键型糖基含量为16.4%。二、多糖CSP-1体外抗炎活性研究脂多糖(LPS)诱导THP-1模型被建立，分别进行细胞活性实验(MTT)，活性氧实验(ROS)，逆转录-聚合酶链反应(RT-PCR)和蛋白质印记分析(WestBlotting)，评价多糖CSP-1体外抗炎活性。结果表明，多糖CSP-1剂量依赖性抑制LPS诱