布鲁氏菌 s2 wboa基因缺失株的构建及免疫效果

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1、中国农业科学2008,41(8):2448-2453ScientiaAgriculturaSinicadoi:10.3864/j.issn.0578-1752.2008.08.033布鲁氏菌S2WboA基因缺失株的构建及免疫效果丁家波，程君生，牟巍，毛开荣，张尔利，蒋玉文（中国兽医药品监察所，北京100081）摘要：【目的】WboA基因编码光滑型布鲁氏菌脂多糖（LPS）O－侧链合成必须的糖基转移酶，该基因的缺失或破坏会影响布鲁氏菌光滑型表型的形成。本研究拟构建WboA基因缺失的重组粗糙型布鲁氏菌，以使布鲁氏菌弱毒疫苗与野毒株布鲁氏菌感染相区分。

2、【方法】以猪源光滑型布鲁氏菌S2株为研究对象，通过同源重组将氯霉素r抗性基因（Cm）完全替代S2株的WboA基因，获得重组粗糙型布鲁氏菌rS2-WboA株。【结果】rS2-WboA株在适宜7的培养基（TSA）上传50代后仍保持对氯霉素的抗性。用1×10CFUrS2-WboA免疫Balb/c小鼠和豚鼠，1个月11后均能通过平板凝集试验检测到粗糙型抗体。1×10CFUrS2-WboA菌攻毒Balb/c小鼠后，不会引起死亡，并且能抵抗200CFU强毒M28的攻击。小鼠试验显示了rS2-WboA与原始株S2相似的保护性和更高的安全性，其保护性也略高于另

3、一重组株rS2-WbkC。【结论】WboA可作为构建重组粗糙型布鲁氏菌疫苗株缺失的靶基因。关键词：布鲁氏菌；WboA基因；免疫性ConstructionofaWboA-DeficientBrucellasuisS2StrainandItsImmuneEffectDINGJia-bo,CHENGJun-sheng,MUWei,MAOKai-rong,ZHANGEr-li,JIANGYu-wen(ChinaInstituteofVeterinaryDrugControl,Beijing100081)Abstract:【Objective】WboAg

4、eneencodesaglycosyltransferase,anenzymeessentialforthesynthesisofOantigen.DisruptionoftheWboAgeneinsmoothB.abortusandB.melitensisresultsinrough,attenuatedmutantswhichfailtoproducetheOpolysaccharide(Oantigen).Inthisstudy,whetherthewboAgenedisruptionisresponsiblefortheroughphe

5、notypeofB.suis2strainr(S2)wasexplored.【Method】Chloramphenicolresistancegene（Cm）wasclonedintothegenomicDNAofS2byhomologousrecombinationwithknockingouttheWboAgene,andtherecombinantrS2-WboAwasobtained.【Result】rS2-WboAwasconversedintorough-phenotypefromsmooth-phenotype.Therecomb

6、inantkepttheabilitytochloramphenicolresistanceafter507passagesintrypticsoyagar(TSA)freeofchloramphenicol.1×10CFUrS2-WboAcouldinducespecificroughantiseruminmice11orguineapigs,whichcouldbedetectedbyaggregationtests.Nomicewerediedafterinoculationof1×10CFUrS2-WboA.Afterwards,the

7、rS2-WboAimmunizedmicecouldresistthechallengeof200CFUvirulentM28.MicetestsshowedrS2-WboAofferedsimilarprotectiontoS2strain,butmoresafethanS2.ItsprotectiveeffectwasalittlebetterthantheotherrecombinantstrainrS2-WbkC.Inviewoftheseresults,rS2-WboAisapromisingcandidateforvaccinest

8、rain.【Conclution】WboAisaprospectivecandidateasagenedeletiontargetforbrucell