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时间:2019-03-08
《布鲁氏菌 s2 wboa基因缺失株的构建及免疫效果》由会员上传分享,免费在线阅读,更多相关内容在教育资源-天天文库。
1、中国农业科学2008,41(8):2448-2453ScientiaAgriculturaSinicadoi:10.3864/j.issn.0578-1752.2008.08.033布鲁氏菌S2WboA基因缺失株的构建及免疫效果丁家波,程君生,牟巍,毛开荣,张尔利,蒋玉文(中国兽医药品监察所,北京100081)摘要:【目的】WboA基因编码光滑型布鲁氏菌脂多糖(LPS)O-侧链合成必须的糖基转移酶,该基因的缺失或破坏会影响布鲁氏菌光滑型表型的形成。本研究拟构建WboA基因缺失的重组粗糙型布鲁氏菌,以使布鲁氏菌弱毒疫苗与野毒株布鲁氏菌感染相区分。
2、【方法】以猪源光滑型布鲁氏菌S2株为研究对象,通过同源重组将氯霉素r抗性基因(Cm)完全替代S2株的WboA基因,获得重组粗糙型布鲁氏菌rS2-WboA株。【结果】rS2-WboA株在适宜7的培养基(TSA)上传50代后仍保持对氯霉素的抗性。用1×10CFUrS2-WboA免疫Balb/c小鼠和豚鼠,1个月11后均能通过平板凝集试验检测到粗糙型抗体。1×10CFUrS2-WboA菌攻毒Balb/c小鼠后,不会引起死亡,并且能抵抗200CFU强毒M28的攻击。小鼠试验显示了rS2-WboA与原始株S2相似的保护性和更高的安全性,其保护性也略高于另
3、一重组株rS2-WbkC。【结论】WboA可作为构建重组粗糙型布鲁氏菌疫苗株缺失的靶基因。关键词:布鲁氏菌;WboA基因;免疫性ConstructionofaWboA-DeficientBrucellasuisS2StrainandItsImmuneEffectDINGJia-bo,CHENGJun-sheng,MUWei,MAOKai-rong,ZHANGEr-li,JIANGYu-wen(ChinaInstituteofVeterinaryDrugControl,Beijing100081)Abstract:【Objective】WboAg
4、eneencodesaglycosyltransferase,anenzymeessentialforthesynthesisofOantigen.DisruptionoftheWboAgeneinsmoothB.abortusandB.melitensisresultsinrough,attenuatedmutantswhichfailtoproducetheOpolysaccharide(Oantigen).Inthisstudy,whetherthewboAgenedisruptionisresponsiblefortheroughphe
5、notypeofB.suis2strainr(S2)wasexplored.【Method】Chloramphenicolresistancegene(Cm)wasclonedintothegenomicDNAofS2byhomologousrecombinationwithknockingouttheWboAgene,andtherecombinantrS2-WboAwasobtained.【Result】rS2-WboAwasconversedintorough-phenotypefromsmooth-phenotype.Therecomb
6、inantkepttheabilitytochloramphenicolresistanceafter507passagesintrypticsoyagar(TSA)freeofchloramphenicol.1×10CFUrS2-WboAcouldinducespecificroughantiseruminmice11orguineapigs,whichcouldbedetectedbyaggregationtests.Nomicewerediedafterinoculationof1×10CFUrS2-WboA.Afterwards,the
7、rS2-WboAimmunizedmicecouldresistthechallengeof200CFUvirulentM28.MicetestsshowedrS2-WboAofferedsimilarprotectiontoS2strain,butmoresafethanS2.ItsprotectiveeffectwasalittlebetterthantheotherrecombinantstrainrS2-WbkC.Inviewoftheseresults,rS2-WboAisapromisingcandidateforvaccinest
8、rain.【Conclution】WboAisaprospectivecandidateasagenedeletiontargetforbrucell
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