雷帕霉素通过调控mtor信号通路及sirt水平增加雌性大鼠的卵泡储备和延长卵巢寿命

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1、雷帕霉素通过调控mTOR信号通路及SIRT水平增加雌性大鼠的卵泡储备和延长卵巢寿命RapamycinpreservesthereserveoffolliclepoolandextendstheovarianlifespanoffemaleratsviamodulatingthelevelofmTORsignalingpathwayandsirtuin姓名张杏梅导师罗丽莉教授专业妇产科学单位汕头大学医学院第一附属医院课题来源：国家自然科学基金（No.81270670/No.81070458）汕头大学医学院2013年5月学位论文原创性声明本论文是我个人在导师指导

2、下进行的工作研究及取得的研究成果。论文中除了特别加以标注和致谢的地方外，不包含其他人或其它机构已经发表或撰写过的研究成果。对本文的研究做出贡献的个人和集体，均已在论文中以明确方式标明。本人完全意识到本声明的法律责任由本人承担。作者签名：日期：年月日学位论文使用授权声明本人授权汕头大学保存本学位论文的电子和纸质文档，允许论文被查阅和借阅；学校可将本学位论文的全部或部分内容编入有关数据库进行检索，可以采用影印、缩印或其它复制手段保存和汇编论文；学校可以向国家有关部门或机构送交论文并授权其保存、借阅或上网公布本学位论文的全部或部分内容。对于保密的论文，按照保密的有

3、关规定和程序处理。作者签名：导师签名：日期：年月日日期：年月日汕头大学医学院硕士学位论文摘要研究目的：观察雷帕霉素（Rapamycin）对成年雌性大鼠各级卵泡发育及卵巢寿命的影响，并对mTOR信号通路及SIRT在其中的作用进行探讨。材料与方法：将16只雌性SD大鼠随机分为：对照组和雷帕霉素干预组。雷帕霉素溶解在5.2%Tween-80和5.2%聚乙二醇400中。在正常摄食状态下，雷帕霉素干预组每隔1天给予腹腔注射5mg/kg雷帕霉素+5.2%Tween-80和5.2%聚乙二醇400，对照组则单纯给予腹腔注射5.2%Tween-80和5.2%聚乙二醇400。实

4、验开始后每日行阴道涂片观察大鼠动情周期变化并记录食物摄入量，每周监测体重变化一次。实验第5周开始进行受孕实验；实验第10周，将大鼠麻醉后取卵巢称量重量，取卵巢组织进行苏木精-伊红染色观察各级卵泡并计数，计算卵泡总数和各级卵泡数量占卵泡总数的百分比例。免疫组织化学染色观察mTOR和P-P70S6K在卵泡中的表达和定位；通过蛋白免疫印迹技术来测量卵巢组织中mTOR、P-P70S6K、SIRT1和SIRT6蛋白的表达。结果：进食量统计结果：对照组大鼠的进食量保持基本稳定，平均21.3±1.0g/d/只；雷帕霉素干预组大鼠的进食量平均14.2±0.6g/d/只，大约

5、是对照组的67.1%(P<0.001)。体重统计结果：对照组大鼠的体重在前4周逐渐增加，在第4周末统计时明显比雷帕霉素干预组大鼠重(291.3±5.2g/只vs.269.5±6.2g/只,p<0.05)。雷帕霉素干预组的体重从第4周到实验结束都没有明显改变，最终体重为255.5±11.3g/只；而对照组大鼠的体重为343.5±11.4g/只,明显比雷帕霉素干预组大鼠重（P<0.001）。卵巢重量统计结果：对照组大鼠的卵巢重量大约是雷帕霉素干预组组大鼠的2.5倍，分别为0.106±0.003gvs.0.047±0.014g（P<0.001).I汕头大学医学院硕

6、士学位论文动情周期监测和受孕实验结果：对照组大鼠在整个实验过程中都表现出规则的动情周期，而且都能正常受孕。雷帕霉素干预组大鼠的动情周期从实验开始第4周就有25%(2/8)出现都不规则；第8周有87.5%(7/8)出现都不规则；到实验结束时所有干预组大鼠的动情周期都不规则，主要表现为动情周期延长，而且都没有任何大鼠受孕。卵泡计数结果：雷帕霉素干预组大鼠原始卵泡数(132.5±13.7vs.63.4±6.2)是对照组的2倍多(P<0.001)，而窦状卵泡数和闭锁卵泡数明显低于对照组，分别为（28.5±3.2vs.55.4±5.7,P<0.01)和（11.9±1.

7、9vs.26.8±3.6,P<0.01）。免疫组织化学染色结果：mTOR和P-P70S6K在卵泡的胞浆表达明显，而在颗粒细胞表达不明显。蛋白免疫印迹技术结果：雷帕霉素干预组卵巢组织中mTOR和P-P70S6K蛋白表达水平明显低于对照组（P<0.05），SIRT1和SIRT6蛋白表达明显增强（P<0.05）。结论：雷帕霉素能够通过抑制mTOR信号通路和增强SIRT水平，抑制原始卵泡向发育卵泡转化，保存原始卵泡储备，从而延长雌性大鼠的卵巢的寿命。关键词：雷帕霉素；mTOR；sirtuin；生殖；卵巢；卵泡II汕头大学医学院硕士学位论文ABSTRACTObject

8、ive:Theaimofthestudyistole