雷帕霉素对人视网膜母细胞瘤hxo-rb44细胞株生长及mtor信号通路的影响

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1、硕士学位论文雷帕霉素对人视网膜母细胞瘤HXO．RB44细胞株生长及mTOR信号通路的影响TheeffectofRAPAonhumanRetinoBlastomaHXO··RB44cellslineandmTORExpression作者姓名：学科专业：学院(系、所)：指导教师：谢思思眼科学湘雅医院许雪亮教授论文答辩日期兰型垒尘号答辩委员会主席l中南大学二O一二年五月原创性声明本人声明，所呈交的学位论文是本人在导师指导下进行的研究工作及取得的研究成果。尽我所知，除了论文中特别加以标注和致谢的地方外，论文中不包含其他人已经发表或撰写过的研究成果，也不包含为获得中南大学

2、或其他单位的学位或证书而使用过的材料。与我共同工作的同志对本研究所作的贡献均已在论文中作了明确的说明。作者签名：—粒吼一且7日学位论文版权使用授权书本人了解中南大学有关保留、使用学位论文的规定，即：学校有权保留学位论文并根据国家或湖南省有关部门规定送交学位论文，允许学位论文被查阅和借阅；学校可以公布学位论文的全部或部分内容，可以采用复印、缩印或其它手段保存学位论文。同时授权中国科学技术信息研究所将本学位论文收录到《中国学位论文全文数据库》，并通过网络向社会公众提供信息服务。⋯名：秘燧名鞋嗍出』月雩日硕士学位论文中文摘要摘要目的本课题旨在通过一种mTOR信号通路特

3、异性抑制剂雷帕霉素(Rapamycin，蝴)对人视网膜母细胞瘤HXO．RB“细胞株进行处理后，观察雷帕霉素对HXO．RB44细胞体外抗增殖及细胞周期影响，并初步探讨其分子机制。方法不同浓度(0、0．625、1．25、2．5、5、10、20nmol／L)RAPA处理人视网膜母细胞瘤HXO．RB“细胞株，应用MTT法测定药物处理48h后细胞生长存活率及抑制率；流式细胞仪进行细胞周期、凋亡率的分析；实时荧光定量PCR技术检测药物处理前后mTOR的mRNA水平差异；Westernblot技术检测药物处理前后mTOR蛋白以及p-mTOR蛋白水平的差异。结果(1)RAPA处

4、理48h的HXO．RB44细胞株，随着药物浓度的增加细胞生长抑制率增高，细胞生存率下降，与对照组相比，0．625nM实验组差异无统计学意义(P>0．05)，其余实验组差异有统计学意义(P

5、学意义(P>0．05)。(4)Westernblot法检测显示随着药物浓度的增加I-EKO．RB“细胞硕士学位论文中文摘要株mTOR蛋白的表达量下降，与对照组相比差异无统计学意义(P>O．05)，实验组(2．5、5nmol／L)P．mTOR蛋白表达量与对照组相比差异有统计学意义(P<0．05)，而(O．625、1．25nmol／L)实验组P．mTOR蛋白表达量与对照组相比差异无统计学意义(P>0．05)。结论(1)RAPA能抑制HXO．RB44细胞株生长及增殖。(2)流式细胞检测结果提示RAPA抑制HXO．RB“细胞株生长及增殖的机制可能主要是抑制了细胞周期进展

6、，将细胞阻滞G1期，且诱导了细胞凋亡。(3)RAPA不能直接影响HXO．RB“细胞株mTOR蛋白和mRNA的表达。(4)PAPA能抑制HXO．RB44细胞株p-mTOR蛋白表达。(5)上述结论为PAPA靶向治疗视网膜母细胞瘤打下良好的实验基础。关键词视网膜母细胞瘤，mTOR，雷帕霉素，分子靶向治疗II硕士学位论文英文摘要ABSTRACTObjective：RetinoblastomacelllineswastreatedwiththemTORinhibitorrapamycin，inordertoexploretheeffectofrapamycinontheH

7、XO-RB44cellslinesinvitroanti—proliferativeandcellcycle，andtoexploreitsmolecularmechanism．Methods：HumanRetinoblastomaHXO-RB44wastreatedwithdifferentconcentrations(0,0．625，1．25，2．5，5，10，20nmol／L)ofrapamycin．Inthesituationofpre-andpost-treatmentofrapamycin，CellproliferationoftheHXO-RB44

8、Celllinesinr