靶向nob1反义寡核苷酸对人卵巢癌细胞skov3影响的体外研究

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1、分类号学校代码10601密级编号Y1001028硕士学位论文靶向NOB1反义寡核苷酸对人卵巢癌细胞SKOV3影响的体外研究学科专业:病理学与病理生理学研究方向:肿瘤病理学研究生姓名:黎雁英学号:Y1001028学位类型:科学学位导师姓名:周英琼教授二O一三年二月独创声明本人声明所呈交的学位论文是本人在导师指导下进行的研究工作及取得的研究成果。据我所知，除了文中特别加以标注和致谢的地方外，论文中不包含其他人已经发表或撰写过的研究成果，也不包含未获得（注：如没有其他需要特别声明的，本栏可空）或其他教育机构的学位或证书使用过的材料。与我一同工作的同志对本研究所做的任何贡献均已在论文中作

2、了明确的说明并表示谢意。学位论文作者签名：黎雁英签字日期：年月日----------------------------------------------------------------学位论文版权使用授权书本学位论文作者完全了解桂林医学院有关保留、使用学位论文的规定，有权保留并向国家有关部门或机构送交论文的复印件和磁盘，允许论文被查阅和借阅。本人授权桂林医学院可以将学位论文的全部或部分内容编入有关数据库进行检索，可以采用影印、缩印或扫描等复制手段保存、汇编学位论文。同时授权中国学术期刊（光盘版）电子杂志社、中国科学技术信息研究所将本学位论文收录到《中国优秀博硕士学位论文全

3、文数据库》、《中国学位论文全文数据库》，并通过网络向社会公众提供信息服务。（保密的学位论文在解密后适用本授权书）学位论文作者签名：导师签字：签字日期：年月日签字日期：年月日1目录靶向NOB1反义寡核苷酸对人卵巢癌细胞SKOV3影响的体外研究…3中文摘要…………………………………………………………………3ABSTRACT………………………………………………………………7英汉缩略词对照表………………………………………………………11前言………………………………………………………………………121材料与方法……………………………………………………151.2方法…………………………………

4、……………………………………232结果………………………………………………………………………383讨论………………………………………………………………………484结论………………………………………………………………………53参考文献…………………………………………………………………54综述………………………………………………………………………57攻读学位期间发表的学术论文目录……………………………………68致谢………………………………………………………………………692靶向NOB1反义寡核苷酸对人卵巢癌细胞SKOV3影响的体外研究中文摘要目的:通过观察NOB1反义寡核苷酸（NOB

5、1-ASODN）对人卵巢癌细胞株SKOV3内NOB1基因及其mRNA表达的影响，和其对SKOV3细胞的生长繁殖、细胞的凋亡及侵袭力的作用，初步探讨NOB1基因在卵巢癌发生发展中的可能作用。为进一步研究其在卵巢癌及其他肿瘤在其发生、发展的过程中分子调节机制;同时为寻找肿瘤靶基因治疗的研究提供新的线索和参考依据。方法：1、设计合成针对NOB1mRNA的特定NOB1-ASODNs序列以及作为对照的无义寡核苷酸片段NOB1-NSODNs，应用转染载体X-tremeGENEsiRNATransfectionReagent将NOB1-ASODNs及NOB1-NSODNs转染至人卵巢癌SKOV

6、3细胞中。实验分空白对照组、转染试剂对照组、无义链(NOB1-NSODN)对照组及(NOB1-ASODN)处理组，在倒置荧光相差显微镜下观察转染后24h不同浓度（0.75μg/ml、1.5μg/ml、3.0μg/ml）的NOB1-ASODN后各组细胞形态的变化，同时连续进行细胞计数7天,取其3均值绘制细胞生长曲线图,选择对细胞影响最大的浓度进行后期实验。2、采用RT-PCR方法从核酸水平检测转染后各组细胞NOB1mRNA的表达情况。3、MTT法检测在3.0μg/ml浓度的反义核苷酸转染后不同作用时间段（24h、48h、72h）下对各组SKOV3细胞的体外增殖抑制效应。4、采用Ho

7、echst33258染色法在倒置荧光显微镜下观察转染后48h各组SKOV3细胞凋亡形态。5、流式细胞术检测和分析转染24h不同处理组SKOV3细胞的早期凋亡率。6、利用Transwell小室法检测转染24h后个处理组SKOV3细胞侵袭能力的改变。结果：1、观察到NOB1-ASODN能成功转染入SKOV3细胞，经过不同浓度组的NOB1-ASODN作用后的细胞,细胞的形态出现明显改变：边缘不整齐、欠光滑、细胞间隙可见较多散在的细胞细胞碎片,同时伴随凋亡小体形成，其中以3.0μg/ml