a型肉毒毒素抑制胆囊收缩素引发的离体大鼠幽门平滑肌收缩

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1、http://www.paper.edu.cnA型肉毒毒素抑制胆囊收缩素引发的离体大鼠幽门平滑肌收缩11121廉会娟，任银祥，刘向文，张雪平，侯一平1兰州大学基础医学院人体解剖学教研室神经生物学研究所，兰州（73000）2兰州生物制品研究所，兰州（730046）E-mail：xiaoye129@163.com摘要：目的:观察A型肉毒毒素（botulinumtoxintypeA,BTX-A）对胆囊收缩素（cholecystokinin,CCK）引发的离体幽门平滑肌收缩作用的影响，探讨其可能的作用机制。方法:选取Sprague-Dawley大鼠，

2、体重270～320g，雌雄不拘。实验前禁食24h，饮水不限。实验时击其头部致昏后取幽门平滑肌一条，将肌条置于37℃Krebs液的恒温平滑肌槽中，肌条长轴与电极长轴平行。肌条在1g前负荷下温育1h，随机分为EFS+atropine+lorglumide组、EFS+BTX-A+CCK-8S组、atropine+CCK-8S组，Biolap420E生物机能实验系统记录-8幽门平滑肌条收缩情况。结果:（1）CCK-8S(5×10M)增加幽门平滑肌的张力(P<0.01)和振幅(P<0.05)，CCK1R拮抗剂lorglumide(3µM)明显降低CCK

3、-8S引发的幽门平滑肌收缩的张力(P<0.05)和振幅(P<0.01)；（2）电场刺激（electricalfieldstimulation，EFS,100V,4Hz,60s）引发的幽门平滑肌收缩张力(P<0.05)及振幅(P<0.05)增加，atropine(1µM)降低EFS引发的幽门平滑肌的张力(P<0.05)及振幅(P<0.01)，但仍残留有小的收缩波，CCK1R拮抗剂lorglumide(3µM)完全抑制残余收缩波；（3）BTX-A(10U/ml)完全抑制EFS引发的-8收缩张力(P<0.01)及振幅(P<0.01)，加入CCK-8

4、S(5×10M)不能引发新的收缩波；（4）BTX-A(10U/ml)降低幽门自发性收缩的张力(P<0.01)和振幅(P<0.05)，之后加入CCK-8S-8-8(5×10M)并没有引发新的收缩波；（5）Atropine(1µM)不能抑制CCK-8S(5×10M)引发的幽门平滑肌条的收缩反应。结论:BTX-A通过抑制突触前膜CCK的释放，同时可能阻断CCK与CCK1R的结合而抑制CCK引发的幽门平滑肌的收缩。关键词：A型肉毒毒素；胆囊收缩素；电场刺激；幽门平滑肌中图分类号：R3471引言A型肉毒毒素（botulinumtoxintypeA,BT

5、X-A）是由A型肉毒梭状芽孢杆菌在厌氧环境中产生的一种嗜神经毒素，研究表明BTX-A能抑制平滑肌内源性乙酰胆碱的释放，解除[1]幽门痉挛。胆囊收缩素（cholecystokinin,CCK）是由十二指肠壁Ⅰ型内分泌细胞以及肠神[2]经系统和中枢神经系统的肽能神经元释放的一种神经递质，在调节上消化道运动和分泌中1[3]发挥重要作用，CCK有两种受体：CCK1/CCK2R，介导胃肠运动功能的是CCK1R，CCK[4]与CCK1R结合能引发幽门收缩，本研究利用离体幽门平滑肌条观察BTX-A对CCK引发的幽门平滑肌的收缩是否也具有抑制作用并探讨可能的

6、作用机制。2材料和方法2.1材料Sprague-Dawley（SD）大鼠，体重270~320g，雌雄不拘(兰州大学医学动物实验中心)；AR1140/C型电子分析天平(美国OHAUS公司)；HW-400S型恒温平滑肌槽及BL-420E生物1本课题得到兰州大学医学基金（项目编号：LZUYX200605）以及兰州生物制品研究所基金（项目编号：LIBP07315）的资助。-1-http://www.paper.edu.cn机能实验系统(成都泰盟科技有限公司)；JH-2型张力传感器(北京航天医学工程研究所)；sulfatedCCKoctapeptide

7、（CCK-8S，美国AnaSpec公司）；atropine，lorglumide，L-NAME(Nω-nitro-L-argininemethylester)均购自Sigma公司；BTX-A（兰州生物制品研究所)。2.2幽门平滑肌条的制备实验前禁食24h，饮水不限。实验时迅速敲击动物头部致晕取胃，切取幽门平滑肌一条，肌条长10mm,宽2mm，一端悬挂于组织固定器，另一端垂直连于张力传感器，肌条两侧放置有两根平行的铂金电极，肌条长轴与电极长轴平行，电极另一端与刺激器相连。肌条孵育在2ml的Krebs液中，温度维持在37℃，持续通入95%O2与5

8、%CO2组成的混合气体。Krebs液的组成成分(mmol/L):NaCl,118;KCl,4.7;NaH2PO4,1.0;NaHCO3,25;MgSO4,1.2;D