布莱凯特黑牛coq10合成相关酶coq2基因cdna克隆及其多态性分析

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1、万方数据CloningofCOQ2GenecDNAandAnalyzingofItsPolymorphismsinBlackCattleThesissubmittedtoQngdaoA97彳culturalUniversityInFulfillmentoftheRequirementfortheDegreeof—MasterofAgronomyNiuZhaoshan(CollegeofAnimalScienceandVerterinaryMedicine)Supervisor：Prof．DongYajuanBaiXuejinQingdao．ChinaJune，2013万方数据学位论文独创性声

2、明本人声明所呈交的学位论文是本人在导师指导下进行的研究工作及取得的研究成果。据我所知，除了文中特别加以标注和致谢的地方外，论文中不包含其他人已经发表或撰写过的研究成果。与我一同工作的同志对本研究所做的任何贡献均已在论文中作了明确的说明并表示谢意。如不实，本人负全部责任。学位论文作者签名：埠吕弛签字日期：如岛年6月厉日学位论文版权使用授权书本学位论文作者完全了解学校有关保留、使用学位论文的规定，有权保留并向国家有关部门或机构送交论文的复印件和磁盘，允许论文被查阅和借阅。本人授权学校可以将学位论文的全部或部分内容编入有关数据库进行检索，可以采用影印、缩印或扫描等复制手段保存、汇编学位论文。(保密

3、的学位论文在解密后适用本授权书)学位论文作者签名：蚌吕对签字Et期：却J】)年石月2譬Et导师签字：签字目期：万方数据布莱凯特黑牛CoQ。o合成相关酶C002基因eDNA克隆及其多态性分析摘要c002基因是真核生物中对羟基苯甲酸聚异戊二烯转移酶(PPT)的编码基因，该酶是CoQ，。生物合成过程的主要限速酶，影响着体内CoQ，。的合成和机体表型性状。根据已公布的普通牛cooe基因序列和cDl'lh序列，对c002基因的7个外显子区域设计引物，PCR产物克隆测序后，比对、拼接得到布莱凯特黑牛c002基因的eDNA序列；并采用PCR-SSCP分析与克隆测序相结合的方法对c002基因外显子1、3和6

4、进行多态性研究。结果表明：1布莱凯特黑牛c002基因cDNA序列，总长1546bp，由7个长分别为298bp、167bp、122bp、86bp、134bp、189bp和550bp的外显子组成，第46bp至第1161bp间为其氨基酸编码序列。与普通牛相比，其氨基酸序列第324位由N突变为H。2其外显子1存在三种基因型，其中AB基因型为优势基因型，A等位基因和B等位基因频率相差不大，其PIC值属中度多态。该多态位点为存在于外显子1第55bp处G—T的突变，使编码的氨基酸由A突变为S，进而使突变后蛋白质二级结构减少了1个o【一螺旋和1个p一折叠，增加了1个p一转角。3其外显子3中也存在一个多态位点

5、，为第102bp处A—T的突变，属同义突变。该突变也产生了三种基因型，其中cD基因型为优势基因型；D等位基因为优势等位基因；该多态位点PIC值也属中度多态。4其外显子6仅呈现一种基因型，．该片段无多态性。5外显子1多态性与布莱凯特黑牛的背膘厚有一定的相关性，而与其眼肌面积无关，且两相关性分析均呈现出AB和BB基因型个体平均值较高。本研究成功克隆、拼接了布菜凯特黑牛cooe基因cDNA序列；在外显子1和3各发现1个多态位点，并对外显子1与布莱凯特黑牛的眼肌面积和背膘厚进行了相关性分析，这为研究C002基因多态性与CoQ，。体内合成情况及其他性状相关性奠定了理论数据支撑，为布莱凯特黑牛新品种培育

6、提供了主效基因筛选的理论数据。关键词：布莱凯特黑牛；CoQ，。；coq2基因；SSCP分析；多态性万方数据直量鑫些太堂亟±堂焦盗塞△坠兰巡ItsPolymorphismsinBlackCattleAbstractCOQ2geneiscodingtheenzymeofp-hydroxybenzoicacidpolyprenylpyrophosphatetransferase(PPT)ineukaryotes，whichistherate-limitingenzymeofCoQ10biosynthesis．AccordingtothepublishedbovineCOQ2geneandcDNAs

7、equence，thestudydesignedprimersinthesevenexonregions．Comparedandsplicedonthesequencingresults，wegotandanalyzedthecDNAsequenceofBlackCattleCOQ2gene．WealsousedPCR—SSCPandsequencingtoresearchtheporlymorphismsi