系统性红斑狼疮cd4+t细胞全基因组dna羟甲基化研究

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1、中图分类号盥UDC610博士学位论文学校代码!Q533密级公珏系统性红斑狼疮CD4+T细胞全基因组DNA羟甲基化研究—l_Genome-wideDNAHydroxymethylationinCD4。TcellsfromPatientswithSystemicLupusErythematosus作者姓名：学科专业：研究方向：学院(系、所)：指导教师：张轶群临床医学皮肤病与性病学湘雅二医院陆前进教授论文答辩日期坐壁：生：矽答辩委员会主席中南大学二。一三年五月原创性声明本人声明，所呈交的学位论文是本人在导师指导下进行的研究工作及取得的研究成果。尽我

2、所知，除了论文中特别加以标注和致谢的地方外，论文中不包含其他人已经发表或撰写过的研究成果，也不包含为获得中南大学或其他单．位的学位或证书而使用过的材料。与我共同工作的同志对本研究所作的贡献均已在论文中作了明确的说明。作者签名：盗丝叠日期：超年鱼月翌日学位论文版权使用授权书本人了解中南大学有关保留、使用学位论文的规定，即：学校有权保留学位论文并根据国家或湖南省有关部门规定送交学位论文，允许学位论文被查阅和借阅；学校可以公布学位论文的全部或部分内容，可以采用复印、缩印或其它手段保存学位沦文。同时授权中国科学技术信息研究所将本学位论文收录到《中国学

3、位论文全文数据库》，并通过网络向社会公众提供信息服务。作者签名：亟熟亟至导师签名：日期：越年羔月挈目本课题资助基金国家重点基础研究发展计划(973计划)(2009CB825605)国家自然科学基金重点项目(30730083)国家自然科学基金重大国际合作项目(81220108017)教育部博士点基金(20120162130003)【I摘要系统性红斑狼疮CD4+T细胞全基因组DNA羟甲基化研究系统性红斑狼疮(systemiclupuserythematosus，SLE)是一种经典的自身免疫性疾病，以血清中出现多种自身抗体和多器官受累为主要特征。该

4、病好发于生育年龄女性，临床表现复杂多样，且不能根治，严重危害着广大患者的身心健康。目前，系统性红斑狼疮确切的病因和发病机制尚不明了，近年来越来越多的研究表明，表观遗传学机制，特别是CD4*r细胞基因异常低甲基化在该病的发生发展过程中起着重要作用。DNA甲基化是表观遗传学领域最早发现的、也是研究得最为成熟的DNA修饰现象。一般认为，基因调控序列的DNA甲基化抑制基因转录；反之，DNA去甲基化则激活基因的表达。我们的课题组经过多年研究发现，SLE患者CD4十T细胞中与自身免疫反应相关的CDlla、CD70等基因调控序列DNA甲基化水平异常降低，导

5、致基因过度表达，诱导CD4+T细胞具有自身反应性，杀伤自身巨噬细胞或过度辅助自身B细胞产生大量的自身抗体，从而诱发或加重自身免疫反应。可见，CD4+T细胞中特定基因调控序列病理性低甲基化是致使SLE发病的重要分子机制之一。然而，导致SLECD4+T细胞基因甲基化状态异常的具体机制至今仍未完全阐明。DNA羟甲基化是近年来新发现的一种调节DNA甲基化的方式，该过程的产物——5一羟甲基胞嘧啶作为一种新的DNA碱基修饰形式，被喻为基因组中的“第六种碱基”。DNA中5一甲基胞嘧啶(5-methylcytosine，5mC)被双加氧酶家族TET(ten。

6、eleventranslocation)蛋白进一步氧化，即成为5一羟甲基胞嘧啶(5_hydroxymethylcytosine，5hmC)。研究表明，I【I5hmC可能参与DNA去甲基化和基因表达调控。一方面，5hmC可能作为中间产物参与主动或被动去甲基化过程；另一方面，5hmC可能通过取代5mC修饰而解除后者所发挥的生物学作用，或自身招募其他效应蛋白来调节基因转录。总之，5hmC对DNA去甲基化和基因表达调控起着十分重要的生物学作用。作为表观遗传学的前沿与热点研究内容，DNA羟甲基化无疑潜藏着许多新的表观遗传特性及信息有待发掘。结合我们前期

7、研究发现的SLE与某些基因调控序列DNA异常甲基化状态及基因调控之间的密切关系，我们推测DNA羟甲基化很可能在SLE的发病过程中扮演着重要角色，或是通过改变DNA甲基化状态、或是通过自身独立的基因调控途径。鉴于目前尚未有任何关于DNA羟甲基化在SLE中的研究及相关信息报道，本课题拟首次通过羟甲基化DNA免疫共沉淀：卷片hMeDIP．chip检测5hmC在SLE患者及正常人CD4+T细胞全基因组范围的分布情况，获得SLECD4+T细胞DNA羟甲基化差异图谱，并进一步探究DNA羟甲基化在SLE自身免疫反应发病机制中的作用，为SLE的诊治寻找有效的

8、新途径并提供理论依据。IV第一章系统性红斑狼疮CD4+T细胞全基因组DNA羟甲基化谱第一节系统性红斑狼疮CD4+T细胞全基因组DNA羟甲基化图谱目的：研究SLE患者