异育银鲫免疫基因的克隆及表达分析和重组IFNc蛋白抗Ⅱ型鲤疱疹病毒的免疫保护研究

《异育银鲫免疫基因的克隆及表达分析和重组IFNc蛋白抗Ⅱ型鲤疱疹病毒的免疫保护研究》由会员上传分享，免费在线阅读，更多相关内容在学术论文-天天文库。

1、上海海洋大学硕士学位论文学校代码：10264研究生学号：M150104141上海海洋大学硕士学位论文异育银鲫免疫基因的克隆及表达分析和重组IFNc蛋白抗题目：Ⅱ型鲤疱疹病毒的免疫保护研究CloningandExpressionAnalysisofImmuneGenesincruciancarp(Carassiusauratusgibelio)andthe英文题目：ImmuneProtectionofRecombinantIFNcProteinagainstcyprinidherpesvirus2专业：临床兽医学研究方向：水生生物病毒学姓名：夏思瑶指导教师：吕利群二O一八年四月五日上海海洋

2、大学硕士学位论文上海海洋大学硕士学位论文上海海洋大学硕士学位论文答辩委员会成员名单姓名工作单位职称备注刘万红武汉大学教授主席黄赞武汉大学教授委员徐鸿绪中山大学教授委员张俊彬深圳大学教授委员姜有声上海海洋大学副教授委员喻飞/王博士生/博上海海洋大学秘书浩后答辩地点病原库D101答辩日期20180519上海海洋大学硕士学位论文异育银鲫免疫基因的克隆及表达分析和重组IFNc蛋白抗Ⅱ型鲤疱疹病毒的免疫保护研究摘要异育银鲫（Carassiusauratusgibelio）是亚洲最受欢迎的食用鱼类，鲤疱疹病毒Ⅱ型（cyprinidherpesvirus2，CyHV-2）是唯一已知的鲫鱼病毒病原体。I

3、型干扰素基因在病毒核酸被宿主细胞识别时诱导，被公认为在提供针对各种生物体中的病毒的局部或全身保护中的发挥重要作用。在转录组分析中发现部分异育银鲫基因响应CyHV-2感染的差异表达，部分干扰素转录物在被感染的异育银鲫肾中显著上调，该干扰素在本实验中被命名为异育银鲫IFNc（ccIFNc）。IκBα（InhibitorofNF-κB），Rab21（RabGTPase21）在先天免疫中起重要作用，它们被抑制消减杂交(SuppressionSubtractiveHybridization,SSH)证实为感染鲤疱疹病毒Ⅱ型（CyHV-2）的异育银鲫中差异表达的免疫相关基因。通过RACE技术进一步确

4、定了异育银鲫IFNc，IκBα，Rab21的完整ORF，IFNc的全长cDNA包含一个549bp的开放阅读框（ORF），编码182个氨基酸的蛋白（GenBank登录号BankIt2033924），异育银鲫IκBα的全长cDNA包含一个933bp的开放阅读框（ORF），编码310个氨基酸的蛋白（GenBank登录号KJ784543），Rab21的全长cDNA包含一个648bp的开放阅读框（ORF），编码215个氨基酸的蛋白（GenBank登录号KJ784545）。系统发育分析表明，ccIFNc与来自其他水生生物的已知I型IFN基因聚类，IκBα，Rab21显示出与其他硬骨鱼中的转录物高度同

5、源。定量RT-PCR分析表明，健康异育银鲫中，IκBα，Rab21在所检测的所有鲫鱼组织中均以低水平表达，这些基因在CyHV-2感染后6-24小时在肾中显著上调（P<0.01），数据表明IκBa，Rab21可能有潜在的抗病毒功能，IκBα和Rab21可作为宿主对CyHV-2感染免疫反应的免疫标记。健康异育银鲫中，ccIFNc在脾，鳃，肾和肌肉中具有相对较高的表达水平。在CyHV-2的攻击下，ccIFNc的转录水平在所有组织中都有明显上调，尤其是在脾和鳃中，分别增加了436和158倍。肌肉（i.m.）注射编码ccIFNc的真核表达质粒１上海海洋大学硕士学位论文（pEGFP-cIFNc）观察

6、到ccIFNc表达明显增加高于对照细胞15倍，CyHV-2的复制效率显着低于对照组，过表达IFNc的异育银鲫总体死亡率降低了30％，死亡时间有所延迟，本文研究表明，ccIFNc属于I型干扰素家族，在对抗鲫鱼CyHV-2感染方面具有潜在的作用。关键词：异育银鲫，鲤疱疹病毒Ⅱ型，异育银鲫IFNc，IκBα，Rab21２上海海洋大学硕士学位论文CloningandExpressionAnalysisofImmuneGenesincruciancarpCarassiusauratusgibelioandtheImmuneProtectionofRecombinantIFNcProteinagai

7、nstcyprinidherpesvirus2ABSTRACTCruciancarp(Carassiusauratusgibelio)isapopularfoodfishinAsia,andCyHV-2(CyprinidHerpesvirus2)istheonlyknownviralpathogenforcruciancarp.IκBα(NF-κBinhibitor),Rab21(RabGTPase21)playimportantr