鲈鲤免疫相关基因的克隆及日粮蛋白水平对其表达量的影响

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1、分类号—巧６５．１９９，＿学号Ｓ２０１２３３０１四川巧业大学硕±学位论文曼卢鱼里免疫相关基因的克隆及日粮蛋白水平对其表达量的影响邵珊珊指导教师黎樵兵副教巧学科专业将种经济动物饲养（含香、隧）研究方向特种经济动物养猜２０１５年６月论文独御性声明本人郑重声明：所呈交的学位论文是我个人在导师指导下进行研究工作所取。得的成果尽我所知，除了文中特别加Ｗ标注和致谢的地方外，学位论文中不包含其他个人或集体已经发表或撰写过的研究成果，也不包含为获得四川农业

2、大学或其它教育机构的学位或证书所使用过的材料一同工作的同志对本研究所。与我做的任何贡献均已在论文中作了明确的说明并表示了谢意。巧２－研究生签名：年月日＾沪（［ｒ关于论文使用援巧的声明本人完全了解四川农业大学有关保酉、使用学位论文的规定：，即学校有权保留并向国家有关部口或机构送交论文的复印件和电子版，允许论文被查阅和借阅，可Ｗ采用影印、缩印或扫描等复制手段保存、汇编学位论文。同意四川农业大学可Ｗ用不同方式在不同媒体上发表、传播学位论文的全部或部分内容。□本论文不保密。

3、□本论文保密，在＿年解密后适用本授权。＿＂”（请在上□内划Ｖ）＇研究生签名：［年／月／Ｓ日＾导师签名年月／支曰摘要本试验对妒鍵幼鱼好成Ｍ－ａ和化－／０４、７ＷＦ等个免疫相关基因完整的编码区序列进行了克隆和分析，并研究不同蛋白水平日粮饲喂妒趣幼鱼后，４种免疫基因在各组织中表达模式；另外为筛选稳定内参基因，探讨了常用－Ｗ沁管家基因￡庐／〇｛、公２Ｍ、０公Ｃ、知和ＧＡＰＯ／／基因在同等试验条件下在多种组织表达稳定性。试验结果充实和巧展了妒趣营养免疫学研究资料，为妒趣健康

4、养殖提供了试验依据。试验采用克隆、测序等基本方法获得相关免疫基因序列。采用单因子方案设计，选择４８０尾体质健康、平均体重在（１５．２±ｌ．ｌ）ｇ餅趣幼鱼，随机分为４组，每组３个重复，每个重复４０尾，分别饲喂蛋白质水平为３７．４１％（Ｉ）、４０．１０％〇（ＩＩ）、４４．３４／〇（扭）、４９．２０％（ＩＶ）的试验日粮。８０ｄ试验期后，每组随机挑选６尾鱼，采集大脑、腮、头肾、脾脏、肝脏、后损、皮肤和也脏等组织，采用－ＰＣＲ）检测样品中各基因表达量炎光定量聚合酶链式反应（ＲＴ，并

5、用民ｅｆｉｎｄｅｒ和ｇｅＮｏｒｍ软件分析内参基因稳定性。结果表明：诚ｎ－１．成ｐｃ、ＴＴＳＷｃｃ、Ｏｅ／ｅｎ加、化基因ＣＤＳ区序列：４种基因全长分别为２８２、７１１、２０４、５４０ｂｐ；分别编码％、２３６、６７、Ｈ９个氨基酸；信号化切割－２￣－？位点分别在２４５、５０５１、２４２５和２２２３位间。各基因编码氨基酸进化树与一ｋＤａ、２６ｋＤａ、形态分类学地位基本致，预测的编码蛋白质分子量分别为１０．６．４？７．２ｋＤａ和２０．９ｋＤａ；等电点为６．３９、５．２５、８．２２和８．４２；

6、Ｏｅ／ｅ丹ｗ乃编码蛋白为疏。水性蛋白质，其他基因编码蛋白为亲水性蛋白质２一．没有单稳定的内参基因可Ｗ适用于不同蛋白水平日粮饲喂的各组妒趣ｒ－不同组织中的表达分析。通过民ｅｆｍｄｅ分析可知，ＥＦｌａ在不同组织间表达最稳一一定，最适合做单内参基因组织中最稳定表达基因不同；在不同姐间同，肝脏和皮肤中为巧叫《，后肠、脾脏、腮、也脏和头肾为度２Ｍ，大脑为饼）Ｃ，送些基因适合在相应组织中做单一＋内参基因。Ｇｅｎｏｒｍ分析，所有Ｖｎ／ＶｎＩ都小于化１５，说明２个最稳定内参基因足化瞒足在相应

7、条件下的定量校正。３－ｅｅｗｍ．４种基因在各组织中均可检测到７７ＶＦａ外且具有组织特异性。公，除／＜０皮肤中表达量显著高于其他组织（戶．０５）成ｃ诚《在巧脏中表达最髙，其次；ｐ为脾脏和后肠；化，不同组织间差异显著在腮中表达显著高于其Ｉ（戶＜０－．０如、、ｒｉＶＦａ他各组织，其次为脾脏后肠头肾等組织；在各组织中表达＞＇０－差异不逗著（戶．Ｍ）。总体表达量来看，化和ｒｗａ在各組织中表达水平相对较低。’４椎着日粮Ｚ）ｅｗ－、化７０蛋白水平提高，／ｅｎ５７在大脑在腮和后肠表达模式相

8、同，表达水平均呈现先升离后降低趋势，最高表达都出现在ＩＩ组，显著高于其他各组（戶＜０．０５），２种基因在其余组织各组间表达差异不显著（Ｐ＞０．０５）；Ｗ巧Ｃ况ｎ在大脑、肝脏和脾脏中表达量先増加后降低，均在曲组达到最高，其余组织各组闻表达差异不显著（ｉ＾０．０５）；基因除了也脏中有先升高后下降趋势外，其他各组织组间差异不显著（户＜０．０５）。研究结果提示一，检测各组不同组织４种基因表达时，可考虑饼