β-葡聚糖和脂多糖对异育银鲫免疫调节作用的研究

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1、华中农业大学硕士学位论文β-葡聚糖和脂多糖对异育银鲫免疫调节作用的研究姓名：陈超申请学位级别：硕士专业：水生生物学指导教师：王卫民20031201摘要将酵母S一葡聚糖(p一-Glucan)定量添加到饲料中，投艰已经注射接种福尔马林灭活的A．hNrophila菌苗的异育银鲫(Carassiusaurstusgibolio)，28d后，通过测定供试鱼的增重量、多项免疫应答指标、谷丙转氨酶活性(SGPT)、血清总蛋白含量以及活菌攻毒后的免疫保护率(RPS)，研究了酵母B一葡聚糖对受免异育银鲫免疫应答的增强作用。研究结果证明，用添加200．0mg·k91·d1酵母B一葡聚糖的饲料投喂受免

2、异育银鲫，不仅可以使受免异育银鲫对灭活嗜水气单胞菌的免疫应答水平提高，增强鱼体抵抗嗜水气单胞菌活菌攻毒的能力，而且还具有一定的促进生长和改善鱼体肝功能的作用。研究结果表明将酵母B一葡聚糖作为渔用免疫激活剂，经口照的途径定量给予，可以达到增强鱼体免疫应答能力的目的。用温酚法(phenol一-water)从哈维氏弧菌(附舒如har州)、鳗弧菌(Fibrioanguiltarum)和副溶血弧菌(Fibrioparahaemo．耖titus)中提取粗脂多糖(LPS)，并对”harveyi的LPS化学成分进行分析的基础上，将3种菌体粗LPS作为免疫原，分别接种异育银鲫后，通过测定受免鱼的凝

3、集抗体效价，头肾和血液中吞噬细胞的吞噬活性和杀菌活性等方法，检测3种弧菌的粗LPS对异育银鲫免疫应答。研究结果证明了3种弧菌的粗LPS对异育银鲫均具有较强的免疫原性，与对照鱼相比，受免鱼的头肾和血液中吞噬细胞的吞噬活性和杀菌活性明显上升，免疫血清中出现了对3种弧菌的福尔马林灭活菌体(FKC)的交叉凝集抗体，证实了在3种弧菌的粗LP$上存在菌体的共同保护性抗原，而且这些共同保护性抗原对异育银鲫具有较强的免疫原性，同时也说明了用改良的温酚法从3种弧菌中提取粗LPS，可以有效地保存其中的有效抗原。用从柱状嗜纤维菌(◇tophaga。。-删一s)中提取的粗LPS，对异育银鲫注射接种后，观

4、察了粗LPS在鱼体内的分布和消长规律。研究结果证明，接种粗LPS1h后，试验鱼的肾、脾和肝脏组织切片中即有粗LPS出现，3h后在试验鱼的鳃组织切片中出现粗LPS。证明接种的粗LPS在lh内就已经进入试验鱼的肾、脾和肝脏，而在3h内进入了鳃组织。接种粗LPS48h后，粗LPS在试验鱼的脾、肝和鳃组织中消失，而在肾组织中尚有粗LPS存在。阐明粗LPS在鱼体内的转运特点与消长规律，将有利于揭示鱼类对粗LPS的免疫应答规律。本研究通过异育银鲫对酵母B一葡聚糖和鱼类的几种病原菌菌体粗LPS等2种多糖物质免疫应答的研究，证实了这2种物质由于在结构和化学特性上的差别，将这2种多糖物质作为免疫原

5、，虽然都可以诱导异育银鲫吞噬细胞的吞噬活性和杀菌活性等非特异性免疫力，增强鱼体对多种病原菌的抗感染能力，并且显示出较强的佐剂性，但是，菌体粗LPS还可以诱导受免鱼体产生较强的特异性免疫应答。关键词酵母0一葡聚糖；脂多糖：异育银鲫；免疫应答¨AbstractGibelcarp(Carassiusauratusgibelio)wereinoculatedwithformalinkilledAenomon口shydrophilaandwerefedwithfeedsupplementedwithappropriateamountofyeast13-glucan．28daysaftert

6、heinoculation，theinfulenceofdietaryyeast[j-glucanontheresistanceofgibelcarpagainstA．hydrophilaweredeterminedbyexamingtheirgainedweight,SGPT,immunogicalparameters，andbychallengingwithliveA+hydrophila．Theresultsshowedthataddingyeast13-glucanwitharatioof200．0mg‘kg～·d．1intothefeedofgibelcarpcanup

7、gradetheimmuneresponselevel，strengthentheirresistancetoA．hydrophilaaswellasimprovetheirliverfunctionandprompttheirgrowthtosomedegree．Theresultsshowedthat3-glucancazlbeusedasanimmunostimulantinaquaculturetOupgradetheimmunityoffishthoughoralues