相关高血压性脑出血mirnas基因标记物的研究

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1、密级：学校代码：10075分类号：学号：20101622医学硕士学位论文相关高血压性脑出血miRNAs基因标记物的研究学位申请人：韩冰指导教师：王洪教授学位类别：医学硕士学科专业：外科学授予单位：河北大学答辩日期：二○一三年六月ClassifiedIndex:CODE:10075U.D.C:NO:20101624ADissertationfortheDegreeofM.MedicineTheStudyonGeneticMarkersofmiRNAsinPlasmaofthePatientswith

2、HypertensiveCerebralHemorrhageCandidate:HanBingSupervisor:Prof.WangHongAcademicDegreeAppliedfor:MasterofMedicineSpecialty:SurgeryUniversity:HebeiUniversityDateofOralExamination:June,2013摘要摘要在我国，高血压性脑出血（Hypertensiveintracerebralhemorrhage,HICH）的发病率逐年增加

3、，是世界上HICH高发的国家之一。HICH由于其出血部位位于深部脑组织，单纯手术治疗难以达到满意的效果，其致残率、致死率极高，给家庭和社会带来了沉重的经济负担。近年来，如何有效的预测HICH的发生成为研究的热点，这就要求我们要寻找到有效的分子标记物，对其在HICH的发病机制、靶向治疗和预后判断中可能起到的作用进行深入研究。微小RNAs（microRNAs，miRNAs）是一类长度为19-22核苷酸（nt）的内源性的非编码单链小分子RNA，广泛存在于生物界。miRNAs通过与靶mRNA3’UTR区完

4、全或是部分互补结合，调控靶基因的表达，参与生物的生长过程，涉及骨骼、心肌、神经、造血干细胞等组织器官的发育等生理及病理过程。在人的体液中，包括血液、尿液、胆汁、脑脊液、腹水和胸水等，可以检测到循环miRNAs。其来源为：①坏死和凋亡细胞的被动释放。②正常细胞借助微泡(microvesicle,MVs)主动释放。在体液中，MVs能够保护miRNAs，使其免受RNA酶降解。我们在体液中检测的miRNAs就是存在于MVs中的miRNAs。近期，关于脑梗塞miRNAs的研究取得一定进展，并且发现几个miR

5、NAs在其发病机制中起着重要的作用。到目前为止，尚无关于HICH血液循环miRNAs的研究进展。我们前阶段研究显示，血液循环中的miRNAs可以作为监测疾病和预测其发生的指标之一。因此，有必要寻找引发HICH的分子标记物，作为预测其发生的指标，并进一步研究其在HICH发病机制中所具有的作用。本研究对HICH血浆进行miRNAs表达谱分析，并初步验证HICH血浆特异性miRNAs。将筛选出的特异性miRNAs用作HICH高危人群中筛选的早期分子标记物，具有重大而深远的意义。同时，本研究后续将进行特异

6、性miRNAs在HICH发病机制中的作用和靶向治疗的相关研究。第一部分HICH血浆miRNAs表达谱分析目的：寻找HICH患者血浆中是否存在相关出血的miRNAs及有差异表达的miRNAsI摘要方法：抽取12例HICH患者和12例健康体检者外周静脉血，运用RNA抽提技术，获取血中总RNA。采用Agilent芯片技术进行miRNAs表达谱研究，用荧光定量RT-PCR技术初步分选。并用相关软件和统计学方法进行数据分析。结果：在HICH患者周围血液中发现7个与出血相关的miRNAs，且有显著差异性表达：

7、miRNA-16、miRNA-223、miRNA-19b、miRNA-107、miRNA-92a和let-7a表达上调，miRNA-1183表达下调。结论：发现高血压性脑出血病人外周静脉血中存在着与高血压性脑出血相关特异性的miRNAs。第二部分microRNA芯片结果的验证目的：验证HICH患者血浆中差异表达的miRNAs分子标记物，预测其在发病机制中所起的作用。方法：抽取60例HICH患者和60例健康体检者外周血，运用RNA抽提技术，获取总RNA。采用RT-PCR技术对7个候选的miRNAs（

8、miRNA-16、miRNA-223、miRNA-19b、miRNA-107、miRNA-92a、let-7a和miRNA-1183）加以验证。并用相关软件和统计学方法进行数据分析。结果：结果显示了在HICH患者外周静脉血中，miRNA-16、miRNA-223、miRNA-19b、miRNA-107、miRNA-92a和let-7a较对照组均显著表达上调，miRNA-1183表达显著下调。结论：实验确定的7个miRNAs可以做为预测HICH发生的分子标记物，且可能参与了HICH的