高血压脑出血及ace基因多态性相关性

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1、高血压脑出血及ACE基因多态性相关性作者单位：130051长春市中心医院高血压脑出血是临床的常见病、多发病，并且发病呈年轻化趋势，部分有家族聚集倾向，从分子水平研究该病的病因学及发病机理，有着十分重要的意义。血管紧张素转换酶基因就是值得注意的一个基因。该基因位于17号染色体的2区3带(17q23)，在ACE基因的第16内含子中有一种Alu重复序列的插入(I,insertion)和缺失(D,deletion)的多态性［1］，其长度约为287bp。近来对血管紧张素转换酶(angiotensin�con�ngenzyme，ACE)基因多态性与疾病的关联进行了

2、多种研究，发现ACE基因多态性与许多心血管疾病有关［2］，但是它与脑出血的关联报道较少。本课题的研究目的是探讨高血压脑出血与血管紧张素转换酶(ACE)基因的关系。1对象和方法1�1研究对象正常对照组168名，平均年龄(48�7±5�5)岁，经详细的病史询问、体格检查及胸片、标准十二导联心电图、肝胆B超、血、尿、粪常规、血生化检查，均为体检健康者；高血压组153名，平均年龄(50�3±0�7)岁；高血压脑出血组112名，年龄(49�0±0�68)岁，脑出血由高血压引起(有高血压病史，就诊时有高血压)，并经头颅CT扫描证实。1�2基因组DNA抽提及体外扩增

3、抽周围静脉血4ml,用酚、氯仿抽提法提取基因组DNA,采用PCR扩增ACE基因的特异片段。引物参照文献设计，由沈阳联星生物公司合成，其核苷酸序列如下:引物A:5′�CTGGAGACCACTCCCATCCTTTCT�3′引物B:5′�GATGTGGCCATCACATTCGTCAGAT�3′PCR反应体系为50μl，模板DNA约300ng，引物A和B各10pmol，0�5mmoldNTPs和1UTaqDNA聚合酶。在PCR热循环仪上扩增，94℃变性1min，58℃退火1min，72℃延伸5min，共30个循环。1�3PCR扩增产物的多态性分析信号肽序列的插

4、入/缺失多态性(I/D)片段以2%凝胶电泳(含溴化乙锭0�5μg/ml)，经100V20min，在紫外光下观察、摄影。1�4SACE活性测定试剂盒由北京海军总医院中心实验室提供。1�5统计学方法用基因计数方法计算正常人的基因型和等位基因频率，用χ2检验及Hardy�Weinberg平衡法评估标本的群体代表性。组间等位基因及基因型频率的差异用χ2检验；SACE活性的数据用均值±标准差(x±s)表示，比较差异用显著性t检验。2结果62�1ACE基因型图1中可见ACEI/D多态性PCR产物的三种类型:泳道Ⅲ只有单一190bp基因片段(D)，为DD纯合子；泳道

5、Ⅰ只有单一490bp基因片段(Ⅰ)，为Ⅱ纯合子；泳道Ⅱ有190bp(D)和490bp(I)两条片段，为ID杂合子。2�2ACE基因型与等位基因频率如表1所示，168名正常人中(Ⅰ组)，DD型27名，ID型89名，Ⅱ型52名；112名高血压脑出血患者中(Ⅱ组)，DD型58名，ID型29名，Ⅱ型25名；153名高血压无脑出血病史的患者中(Ⅲ组)，DD型56名，ID型61名，Ⅱ型36名，三组基因型频率和等位基因的频率如表所示。Ⅱ组与另外两组比较显示：基因型分布有显著性差异，等位基因分布与Ⅰ组、Ⅲ组比较结果不同。表1ACE基因型和等位基因在不同组间的分布组别例

6、数基因型等位基因DDIDIIID正常对照组(Ⅰ组)16827(0�159)89(0�527)52(0�307)143(0�426)193(0�574)高血压脑出血组(Ⅱ组)11258(0�518)29(0�259)25(0�223)79(0�353)145(0�647)高血压无脑出血组(Ⅲ组)15356(0�366)61(0�399)36(0�235)173(0�565)133(0�435)注:以上三组比较基因型分布:D与I:DD与非DD:Ⅱ比Ⅰ,χ2=33�91,P0�05;Ⅱ比Ⅰ,χ2=40�6,P0�053讨论6血管紧张素转换酶(angioten

7、sinconvertingenzyme，ACE)是肾素�血管紧张素系统的关键酶，在机体血压、水电解质稳态、免疫、生殖以及神经传导调节等方面起着重要的作用。近年来国内外研究发现ACE基因多态性与多种疾病的发生和发展有关。我们用PCR方法，通过比较正常对照组、高血压脑出血组、高血压无脑出血病史组的ACE基因分布，研究了ACE基因多态性与高血压脑出血的相关性。伴高血压的脑出血患者的DD基因型和D等位基因频率明显高于无脑出血的高血压患者；无脑出血史的高血压患者DD基因频率明显高于正常对照组，但是该组D等位基因频率低于正常对照组和高血压的脑出血组，这说明DD基因

8、型在高血压脑出血的发病机制中起一定作用，而D等位基因的作用还需要进一步探讨，因为D等位基因频率