血管性痴呆大鼠7b2、pc2在海马区的表达及苯酞干预的影响研究

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1、分类号学校代码10542密级学号—20100—2202090血管性痴呆大鼠7B2、PC2在海马区的表达及丁苯酞干预的影响研究EffectofDlbutylphthalideontheexpressionof782andPC2inhippocampusofvasculardementiarat指导教师姓名、职称壶丛!垩麴量湖南师范大学学位评定委员会办公室二零一三年五月摘要目的：本研究建立在Wistar大鼠血管性痴呆的模型基础上，结合病理、行为学、分子生物学和药物干预等方面，检测在血管性痴呆大鼠海马中782、PC2

2、的表达变化，观察丁苯酞对血管性痴呆大鼠学习记忆能力以及海马中782、PC2表达的影响，探讨丁苯酞对血管性痴呆的可能的治疗新机制。方法：12-14周龄的健康雄性Wistar大鼠80只，体重约2509一3009，随机分为3组：假手术组(n=16)，血管性痴呆模型组(n=32)，丁苯酞干预组(n：32)。根据造模后3天(3d)、1周(1w)、2周(2w)、4周(4w)四个不同的时间点将血管性痴呆模型组、丁苯酞干预组随机分为四个亚组，每个亚组8只。以双侧颈动脉永久结扎法(2一V0法)制作血管性痴呆模型，分离大鼠双侧颈动

3、脉，假手术组只分离不结扎，模型组、丁苯酞干预组永久结扎双侧颈动脉。丁苯酞干预组于手术当日起即灌胃相应剂量的丁苯酞，模型组灌注等量的生理盐水，假手术组不给药。采用HE染色观察病理学变化；应用免疫组织化学检测782、PC2免疫阳性细胞表达水平的动态变化，利用逆转录一聚合酶链反应(RT-PCR)检测海马组织中782mRNA、PC2mRNA的表达。假手术组、模型组4周亚组、丁苯酞干预组4周亚组大鼠于手术后第24天开始行Morris水迷宫试验，测试学习记忆能力，手术后第28天处死大鼠。数据以均数士标准差(；±S)表示，运

4、用SPSS13．0统计软件进行统计分析。结果：1．Morris水迷宫试验假手术组、模型组4周亚组、丁苯酞干预组4周亚组大鼠于术后第24、25、26、27天分别测试Morris水迷宫定位航行试验，以逃避潜伏期作为学习成绩，于术后28天行空间探索试验，以穿越平台次数作为记忆成绩。模型组大鼠的学习和记忆能力均下降，具体表现为逃避潜伏期的时间明显延长，分别为(87．23±4．69，71．32i5．35，42．55±4．26，39．76±3．47)秒，穿越目标平台的次数最少，为(4．45±1．63)次。假手术组大鼠逃避潜

5、伏期最短，分别为(50．22±7．27，31．45±4．23，18．73±4．51，11．34±2．18)秒，穿越目标平台的次数最多，为(8．64±1．52)次。丁苯酞干预组居中，逃避潜伏期分别为(62．32±3．16，42．54±4．83，32．34±5．82，19．94±3．51)秒，穿越目标平台的次数为(6．98±1．45)次。定位航行试验：模型组逃避潜伏期较假手术组明显延长，差异有统计学意义(尸<0．05，P

6、：模型组穿越平台所在位置的次数明显少于假手术组及丁苯酞干预组，差异有统计学意义(P

7、、1周亚组、2周亚组、4周亚组782蛋白的表达水平明显减低，其中以模型组2周亚组表达水平最低。模型组各亚组782的表达与假手术组相比，差异有统计学意义(P<0．05)；丁苯酞干预组各亚组海马CAl区782蛋白的表达量明显高于模型组各亚组相应数值(尸<0．05)，782表达的趋势与模型组大致相同。PC2在假手术组海马CAl区可见明显表达，与假手术组相比较，血管性痴呆模型3天亚组PC2表达水平没有明显变化，差异无统计学意义(P>0．05)，之后呈下降趋势，1周亚组、2周亚组、4周亚组PC2蛋白的表达水平明显减低，其

8、中以模型组2周亚组表达水平最低。模型组l周亚组、2周亚组、4周亚组与假手术组相比，差异有统计学意义(P<0．05)；丁苯酞干预组3天亚组与模型组3天亚组相比，差异无统计学意义(P>0．05)。丁苯酞干预组l周亚组、2周亚组、4周亚组PC2蛋白的表达量明显高于模型组各时间点相应数值(P<0．05)，PC2表达的趋势与模型组大致相同。4．RT-PCR检测结果假手术组大鼠海马CAl区可见明显