精密肝切片技术研究羟磷灰石纳米粒子对肝细胞的影响new

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1、中国药理学与毒理学杂志２００４年８月；１８（４）：３００－３０４·３００·ＣｈｉｎＪＰｈａｒｍａｃｏｌＴｏｘｉｃｏｌ２００４Ａｕｇ；１８（４）：３００－３０４精密肝切片技术研究羟磷灰石纳米粒子对肝细胞的影响吴俊火１，彭仁１，曹献英２，韩颖超２，李世普２（１．武汉大学医学院药理学系，湖北武汉４３００７１；２．武汉理工大学生物中心，湖北武汉４３００７０）摘要：目的研究羟磷灰石纳米粒子（ＨＡＰ）对肝细精密肝切片（ｐｒｅｃｉｓｉｏｎｃｕｔｌｉｖｅｒｓｌｉｃｅｓ）具有正常胞是否具有直接的毒害作用。方法以ＭＴＴ还原肝组织的肝脏细胞类型，并保持了所有细胞间生理量反映肝切片的存活度，乳酸脱氢酶漏出

2、量，ＧＰＴ结构联系，故既具有组织的完整性，又保留肝细胞的及ＧＯＴ漏出率反映对肝切片的毒性作用，以Ｎａ＋功能特点，已广泛用于药物毒性和药物代谢研＋究［６，７］。本文在已建立精密大鼠肝切片技术的基础ＫＡＴＰ酶活性，蛋白质和糖原含量观察其代谢能力，以谷胱甘肽Ｓ转移酶观察肝切片抗氧化水平的上［８］，通过预培养延长肝切片稳定性，观察了ＨＡＰ改变。结果与对照组相比，０．７和１．４ｍｍｏｌ·Ｌ－１对肝细胞的影响，以期进一步认识无机纳米粒子可ＨＡＰ可使肝切片谷胱甘肽Ｓ转移酶活性３～７ｈ明能对肝组织的直接效应。显升高外，其他肝切片活性及代谢指标均无明显差异。结论短期内ＨＡＰ对肝切片无明显毒性作用，１

3、材料和方法不表现浓度效应差异，可使肝细胞抗氧化酶活性升高。１．１动物与药物关键词：大鼠；肝；羟磷灰石纳米粒子；细胞膜通ＳＤ大鼠，雌雄不拘，体重２００～２５０ｇ，武汉大学透性；酶类医学院动物实验中心提供。ＨＡＰ由武汉理工大学生物中心制备，浓度１４ｍｍｏｌ·Ｌ－１，临用前常规高压中图分类号：Ｒ９９－１灭菌，用ＲＰＭＩ培养基稀释至０．７和１．４ｍｍｏｌ·Ｌ。文献标识码：Ａ新生牛血清和ＲＰＭＩ１６４０培养基为Ｇｉｂｃｏ公司产品。文章编号：１０００３００２（２００４）０４０３０００５噻唑蓝（ＭＴＴ）为Ａｍｒｅｓｃｏ公司产品。还原型谷胱甘肽（ｒｅｄｕｃｅｄｇｌｕｔａｔｈｉｏｎｅ，ＧＳＨ）为Ｓｉ

4、ｇｍａ产品，腺苷三纳米材料是２０世纪８０年代中期发展起来的新磷酸（ＡＴＰ）酶试剂盒，乳酸脱氢酶（ｌａｃｔａｔｅｄｅｈｙｄｒｏｇｅ型材料，是粒径小于１００ｎｍ的单晶体或多晶体，具ｎａｓｅ，ＬＤＨ）试剂盒为南京建成生物工程研究所产有独特的小尺寸效应和表面或界面效应，在生物医品．谷丙转氨酶（ｇｌｕｔａｍｉｃｐｙｒｕｖｉｃｔｒａｎｓａｍｉｎａｓｅ，ＧＰＴ）学工程领域，尤其在药物载体、生物材料、人工器官和谷草转氨酶（ｇｌｕｔａｍｉｎｅｏｘａｌｏａｃｅｔｉｃｔｒａｎｓａｍｉｎａｓｅ，等方面具有广泛的应用前景［１，２］。由于纳米材料的ＧＯＴ）试剂盒为上海欣科生物技术研究所产品。特殊性，故以往的宏观

5、物质的安全性评价结果可能１．２方法不适用于其纳米材料，而对机体产生潜在性危参照文献［８］制备肝切片，选取２９０～３１０完［３，４］μｍ害。羟磷灰石纳米粒子（ｈｙｄｒｏｘｙａｐａｔｉｔｅｎａｎｏｐａｒｔｉ整切片进行实验。ｃｌｅｓ，ＨＡＰ）为无机纳米粒子，有报道它能抑制肝癌细培养实验分为两组。未预培养组：制备的肝切胞增殖，导致其胀亡（ｏｎｃｏｓｉｓ）［５］，但是否对肝细胞产片置于１．０ｍＬＲＰＭＩ１６４０培养基（１０％新生小牛血生直接毒性或损害，尚不清楚。清）的２４孔培养板中，３７℃培养箱内（氧饱和度为９５％空气和５％ＣＯ２）进行振荡培养；预培养组：条件收稿日期：２００３１０１６接受日期

6、：２００４０２１１同上，在振荡培养１ｈ后，再移至新鲜培养基中继续作者简介：吴俊火（１９７９－），男，湖北省武汉市人，硕振荡培养。两组切片分别培养０，０．５，２，４和６ｈ（０ｈ士，主要从事生化药理和药物代谢研究；彭仁（１９３５－），女，上海市人，教授，主要从事生化药理和药物代谢研究。指肝切片制备后在ＲＰＭＩ１６４０培养基培养５［９］联系作者Ｅｍａｉｌ：ｐｅｎｇｒｅｎｘｉｕ＠１２６．ｃｏｍＴｅｌ：（０２７）ｍｉｎ）。各组的检测值分别与０ｈ组相比较，观察８７３３１５６５，Ｆａｘ：（０２７）８７３３１６７０两组肝切片活性在０～６ｈ变化的时间趋势。中国药理学与毒理学杂志２００４年８月；

7、１８（４）·３０１·纳米材料实验：大鼠肝切片经过１ｈ预培养后，１．４统计学处理移置于含０．７和１．４ｍｍｏｌ·Ｌ－１数据以珋ｘ±ｓ表示，组间差异采用ｔ检验进行统ＨＡＰ（分别为ＨＡＰ体外抑制肝癌细胞株增殖的最适浓度和最大浓度）［５］计处理。或空白培养基中继续培养，各组分别于１，３，５和７ｈ终止培养。上述不同时间点与空白对照组比较，观２结果察ＨＡＰ对肝细胞毒性作用。１．３检测指标２．１预培养对精密大鼠肝切片技术的稳定性参照文