新疆野苹果dna提取和nts基因pcr扩增体系优化 毕业论文

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1、毕业论文中文题目:新疆野苹果DNA提取和NTS基因PCR扩增体系优化英文题目:StudyonDNAExtractionandNTS-PCRSystemOptimizationinMalussieversii学生姓名系别专业班级指导教师成绩评定2013年６月目录1前言12材料与方法22.1试验材料及仪器设备22.2试剂配制32.3试验方法32.3.1叶片基因组DNA提取32.3.2PCR扩增退火温度筛选42.3.3PCR产物回收52.3.4克隆反应体系的建立及转化53.结果与分析63.1基因组DNA提取优化结果63.2退火温度筛选

2、结果73.3回收产物检测结果83.4新疆野苹果克隆结果93.5新疆野苹果NTS序列分析94讨论104.1DNA提取的优化104.2退火温度对PCR体系的影响114.3试验过程相关注意事项115结论11参考文献13致谢14附录1：相关英文文献15附录2：英文文献中文译文26摘要新疆野苹果是现代人工栽培苹果的直系祖先，也是世界野苹果基因库的重要组成部分，具有极高的科研价值和保护价值。本文以新疆野苹果为材料，根据材料特点及DNA分子的物理化学特性，在CTAB法基础上进行改良，优化新疆野苹果基因组DNA提取方法；退火温度是影响PCR扩增

3、的主要因素之一，以提取基因组DNA为模板，以NTS序列扩增通用序列为引物，进行NTS序列扩增，筛选最佳退火温度，并对扩增产物进行回收、克隆和测序。结果表明，新疆野苹果基因组DNA的提取，改良CTAB法优于传统CTAB法，研磨加入PVP可有效去除多酚，用酚和氯仿混合抽提可降低蛋白残留，沉淀时加入乙酸钠可加快DNA沉淀；PCR扩增体系57℃条件下可获得目的条带。DNA提取及PCR扩增退火温度的优化均为新疆野苹果NTS序列的后续研究提供理论依据。关键词：新疆野苹果；CTAB法；DNA提取；退火温度；优化ABSTRACTMalussie

4、versii(Ledeb)Roemisamoderndirectancestorofcultivatedappleandanimportantpartofthegenepool,withahighscientificvalueandconservationvalue.Inthispaper,Malussieversiiasmaterials,accordingtothematerialcharacteristicsandthephysicalandchemicalpropertiesoftheDNAmolecule,ontheb

5、asisoftheimprovedCTABmethod,thebestgenomicDNAextractionmethodwerestudied；PCRamplificationoftheannealingtemperaturewasoneofthemainfactors,takingextractedgenomicDNAastemplate,NTSsequenceamplificationuniversalprimersforamplificationofNTSsequence,selecttheoptimalannealin

6、gtemperature,andtheamplifiedproductsforrecycling,cloningandsequencing.TheresultsshowsthattheimprovedCTABmethodissuperiortoconventionalCTAB,GrindingofPVPcaneffectivelyremovepolyphenols,increasedphenolchloroformextractiontoreduceproteinresidues,sodiumacetatewasaddedtoa

7、cceleratetheDNAprecipitate；PCRamplificationsystemundertheconditionsof57℃targetbandavailable.DNAextractionandPCRamplificationoptimalannealingtemperatureprovideatheoreticalbasisforfollow-upstudiesofMalussieversiiNTSsequences.Keywords：Malussieversii(Ledeb)Roem；CTAB；DNAE

8、xtraction；NTSSequences；Optimizatio新疆野苹果DNA提取和NTS基因PCR扩增体系优化王俊苹（天津农学院园艺系）1前言新疆野苹果(Malussieversii（Ledeb）Roem)又称塞威氏苹果，属蔷薇科苹果属植物，属于第三纪孑