一种新乳腺癌细胞粘附分子lsectin功能的研究

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1、n南，j·’≯硕十一’≯伊论文摘要一种新的乳腺癌细胞粘附分子LSECtin的功能研究预防兽医学专业硕士研究生曹红梅指导教师：刘力副教授贺福初院士摘要C一型凝集素超家族是一类能选择性识别糖并与之非共价可逆结合的1}酶、非抗体蛋白，其活性依赖Ca2。，在机体的抗感染、抗肿瘤、抗原提黾、免疫调节、移植排斥及炎症反应中发挥着重要功能。LSECtin是一个新的C一型凝集素家族糖识别分子，特异的表达在肝脏窦内皮细胞和淋巴结窦内皮细胞，并在这些细胞上发挥特异的功能。LSECtin与已知的C一型凝集素DC—SIGN、DC—SIGNRSUCD23具有相似的功能结构

2、域和相似的空间结构排列，具有典型的糖基识别功能结构域(CRD)，依赖钙离子结合糖。肿瘤是生物体内一些正常细胞生长火去控制，出现异常分化的细胞群。细胞癌变时伴有细胞膜的改变，细胞膜上的糖基也会产生相应的变化，糖基发生广泛多样的变化，成为凝集素在肿瘤研究中的重点。DC-SIGN是DC病原体模式识别和粘附受体，又作为DC特征性多功能免疫分子，参与DC免疫调节作用。DC可通过DC-SIGN识别肿瘤癌胚样抗原(CEACarcinoembryonic一1ikeantigen)特异性糖基，并结合结肠肿瘤细胞参与抗肿瘤的免疫反应，同时肿瘤细胞也可通过DC-SIG

3、N负调节并抑$IJDC成熟，从而逃脱机体的免疫监视。已有大量研究发现，凝集素可作为肿瘤组织源性的标记、肿瘤特异性诊断的标志、肿瘤恶性的标记和不同肿瘤的分化标记。LSECtin同家族成员DC—SIGN、DC-SIGNR的生物学功能研究以及它们在空间结构上的高度相似强烈提示：LSECtin可能在机体免疫的反应中发挥至关重要的作用，值得深入研究。LSECtin与活化T细胞上的CD44相互作用。CD44是参与细胞一细胞相互作用、淋巴细胞归巢和肿瘤转移的粘附分子，是广泛表达于细胞表面的I型跨膜糖蛋白。人类CD44分两型，『撕南人学硕卜’产伊论文摘硬只有组成

4、型外显子的CD44为标准犁CD44(CD44s或CD441t)。由组成型外显子和变异区(V区)拼接的外显子二者组成的为CD44变异犁。(1)C一型凝集素以及LSECtin的家族成员在肿瘤发生中发挥作用：(2)LSECtin在T细胞上的配体分子为CD44；(3)CD44与乳腺癌的发生发展密切相关。鉴丁二以上几点，本论文的研究目的：阐明LSECtin是否结合乳腺癌细胞；鉴定LSECtin在乳腺癌细胞表面的配体分子；确定LSECtin乳腺癌细胞上识别配体分子特异的糖结构。方法：我们采用RT—PCR和免疫组化检测LSECtin的组织分布，采用流式细胞仪分

5、析Fc—LSECtin重组蛋白是否结合乳腺癌细胞，通过WesternBlotting结合流式分析乳腺癌细胞表面CD44的表达以及CD44抗体封闭实验鉴定LSECtin乳腺癌细胞表面上识别的候选配体分子。进而采用特异的ELISA实验确证LSECtin与乳腺癌细胞表面分子CD44的相互作用。在此基础上，我们用突变体结合实验明确LSECtin与乳腺癌细胞表面分子CD44的相互作用模式。结果：本研究揭示LSECtin能结合高转移乳腺癌细胞MDA-MB-231、MDA-IdB-435s和MCF一7，进一步证实了LSECtin是一个肿瘤细胞粘附分子：West

6、ernBlotting结合流式分析以及CD44抗体封闭实验初步证明CD44为乳腺癌细胞上LSECtin识别的候选配体分子；ELISA实验确证LSECtin在乳腺癌细胞上的配体分子为CD44s；突变体蛋白结合实验结果证明LSECtin和乳腺癌细胞表面分子CD44之间通过蛋白一糖链相互作用。结论：LSECtin是一种新的肿瘤细胞粘附分子，可通过蛋白一糖链模式识别高转移乳腺癌细胞MDA—MB一23l、MDA—MB一435s和MCF一7上的配体分子CD44，很可能在乳腺癌的转移中发挥重要作用。关键词：LSECtin细胞识别乳腺癌细胞CD44II『IL『『

7、钶人‘≯硕f．。学伊沦艾ABSTRACTAnewbreastcancercelladhesionmoleculefunctionofLSECtinPreventiveVeterinaryMedicine，master：CAOHongmeiAdvisor：Asso．Prof．LLULiAcad．HEFuchuABSTI认CTC—typelectinisnon—enzymaticandnon—antibodyprotein，whichcanselectivelybindsugarnon—covalentlyandreversibly．Itplaysa

8、significantroleinanti—infective，anti—tumor,antigen—presenting，immune