乳腺癌细胞侵袭转移相关mirnas的研究

《乳腺癌细胞侵袭转移相关mirnas的研究》由会员上传分享，免费在线阅读，更多相关内容在学术论文-天天文库。

1、复旦大学博士学位论文乳腺癌细胞侵袭转移相关miRNAs的研究姓名：吴正升申请学位级别：博士专业：病理学与病理生理学指导教师：张农2012-03-26复旦大学上海医学院博士学位论文乳腺癌细胞侵袭转移相关miRNAs的研究．▲上--JL刖再乳腺癌是女性最常见的恶性肿瘤之一，严重影响着全世界女性的身心健康。据统计：2010年美国新发恶性肿瘤中，乳腺癌病人占到26％；并且，乳腺癌在所有恶性肿瘤病人的死亡率中占据第三位。肿瘤的侵袭和转移是导致乳腺癌患者死亡的主要原因，但肿瘤细胞侵袭和转移的分子机制目前尚不明了。迄今为止，文献报道了大量乳腺癌发生和

2、发展相关的癌基因或抑癌基因，这些基因在乳腺癌进展和转移过程中发挥了重要作用。近来，微小RNA(mieroRNA，miRNA)由于其在调控基因表达方面的重要作用，成为新的研究热点。miRNAs一类长约18～22nt的单链RNA，它不编码任何蛋白质，具有强大的调控基因表达作用。研究表明，miRNAs广泛表达于各个物种和组织中，并在很多生理病理过程中，如细胞发育、分化、增殖、凋亡和代谢以及肿瘤发生发展和肿瘤转移中均扮演了重要角色。miRNAs通过与特定mRNA结合导致其降解或通过调节特定mRNA的蛋白质翻译过程来抑制其翻译，从而负性调控靶基因

3、表达。所以，在肿瘤中miRNAs根据其靶基因的不同可以相应发挥癌基因或者抑癌基因的角色。目前，在多种常见恶性肿瘤中均发现了异常的miRNAs表达，并且其表达与肿瘤增殖、侵袭和转移等生物学特性相关。如：乳腺癌miR-335能够抑制乳腺癌细胞的侵袭和转移，并且其表达量与患者无转移生存期呈正相关，提示其可能扮演了抑癌基因的角色；而miR-10b在转移性乳腺癌细胞中高表达，并且具有促进乳腺癌细胞的侵袭和转移的功能，提示其可能扮演了癌基因的角色。然而，miRNAs在乳腺癌侵袭和转移过程中的研究刚刚起步，其生物学作用和分子机制尚不明朗。在本研究中，

4、我们将在不同侵袭特性的乳腺上皮细胞中筛选差异性表达的miRNAs，然后在体外研究中探索这些候选miRNA对乳腺癌细胞侵袭和迁移等生物学行为的影响及其分子机制，同时我们将在临床乳腺样本中检测这些miRNAs的表达，分析其与乳腺癌患者临床病理特征和预后的关系，从而探索乳腺癌侵袭相关的miRNAs，为将来合理治疗乳腺癌提供新的生物学靶点。2复旦大学上海医学院博士学位论文第一部分不同侵袭力乳腺上皮细胞差异性miRNA表达谱的研究目的：检测不同侵袭力人乳腺上皮细胞株中miRNAs的表达谱，分析差异性表达的miRNAs，筛选出可能与乳腺癌细胞侵袭力

5、相关的miRNAs。方法：应用高通量miRNA芯片(miRBase数据库11．0版)检测人乳腺上皮细胞株HBLl00、乳腺癌细胞株MCF．7、MDA．MB．468和MDA．MB．231中miRNA的表达谱，通过图像分析和数据统计分析方法，筛选出差异性表达的miRNAs。使用实时荧光定量PCR(real．timePCR)方法验证miRNA芯片结果，同时进一步在临床人乳腺病变(良性病变和乳腺癌)组织中检测miRNAs表达状况。结果：将miRNA芯片分组为①低侵袭乳腺细胞组——_HBLl00和MCF．7，②高侵袭乳腺癌细胞组——MDA．MB．

6、231和MDA．MB．468。对芯片数据进行SAM分析，根据两组细胞miRNA相对表达量的差异和趋势，我们筛选出18个可能与乳腺癌细胞侵袭相关的miRNAs，其中7个miRNAs在高侵袭力乳腺癌细胞组显著上调，“个miRNAs在高侵袭乳腺癌力细胞组显著下调。我们选择其中显著下调的miR-339．5p和miR-340为进一步研究对象，real．timePCR检测结果显示它们在两组乳腺细胞和新鲜乳腺组织中表达状况与miRNA芯片一致。结论：侵袭力不同的乳腺上皮细胞miRNAs表达谱存在差异性表达，提示miRNAs可能参与了乳腺癌侵袭行为的调

7、控。关键词：乳腺癌；miRNAs芯片；miR-339．5p；miR-340；荧光定量PCR中图分类号R737．9复旦大学上海医学院博士学位论文第二部分miR-339-5p和miR-340对乳腺癌细胞迁移和侵袭生物学行为作用的研究目的：检测miR-339．5p和miR．340对人乳腺癌细胞增殖、迁移和侵袭的生物学行为的作用。方法：以乳腺癌细胞MCF．7和MDA．MB．231为研究对象，通过脂质体转染技术分别将miR-339．5p和miR．340的抑制物(ASO)和模拟物(mimic)转入细胞中，检测乳腺癌细胞增殖、迁移和侵袭行为的改变。使

8、用原位分子杂交方法检测临床存档石蜡包埋的乳腺癌和乳腺良性病变组织中miR-339．5p和miR-340表达，并且分析其与乳腺癌临床病理特征和患者预后的关系。结果：过表达miR-339．5p和miR．340可